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专利号: 202010271637X
申请人: 浙江农林大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种埃洛石基印迹固载酶的制备方法,其特征在于,所述的制备方法包括以下步骤:(1)HNTs的纯化:将 HNTs、HCl混合后,在室温下搅拌反应,洗涤后在恒温条件下烘干,将烘干后产物与二甲基甲酰胺、硅烷偶联剂混合后,在通入保护气的条件下回流,回流后的产物进行洗涤若干次,并干燥,然后研磨得到产物1;

(2)将邻苯二甲酸二甲酯、MMA、EDGMA全部溶于二甲基甲酰胺中,持续通入保护气后升温并在保护气中搅拌反应,完全溶解后,加入产物1,超声混匀后加入偶氮二异丁腈,在真空条件下充入保护气体,反应后得到印迹聚合物;

(3)将印迹聚合物采用甲醛与乙酸的混合液进行提取,除去模板和杂质后,干燥后即得印迹HNTs;

(4)对印迹HNTs进行改性,然后进行若干次恒温洗涤后得到产物2;

具体步骤为:将印迹HNTs置于离心管中,依次使用水,水:丙酮体积比=3:7,水:丙酮体积比=5:5,水:丙酮体积比=7:3,丙酮,进行超声震荡洗涤,高速离心机进行离心,然后在常温下,加入N,N'‑羰基二咪唑在印迹HNTs中,恒温超声震荡处理印迹HNTs表面2.5‑5 h,离心分离液体;

(5)将磷酸盐缓冲溶液加入pH值=5.5‑9.0的酯酶溶液中,混合搅匀后,加入产物2,再加入CoCl2,将所得悬浮液在2‑10℃,超声震荡20‑30h后,分离出生物轭合物,洗涤后添加猝化剂,再洗涤若干次后得到终产物,即埃洛石基印迹固载酶。

2.根据权利要求1所述的一种埃洛石基印迹固载酶的制备方法,其特征在于,步骤(1)中HNTs与HCl的质量体积比为0.5‑3g:10mL。

3.根据权利要求1所述的一种埃洛石基印迹固载酶的制备方法,其特征在于,步骤(1)中烘干后产物、DMF、硅烷偶联剂的使用量0.5‑3 g :4mL:1mL。

4.根据权利要求1所述的一种埃洛石基印迹固载酶的制备方法,其特征在于,步骤(2)中邻苯二甲酸二甲酯、MMA、EDGMA的摩尔比为1‑5 :4:20,产物1与偶氮二异丁腈、邻苯二甲酸二甲酯的使用量为0.5g‑8g :20mg:1mmol。

5.根据权利要求1或4所述的一种埃洛石基印迹固载酶的制备方法,其特征在于,步骤(2)中升温至55‑65℃搅拌。

6.根据权利要求1所述的一种埃洛石基印迹固载酶的制备方法,其特征在于,步骤(3)中甲醛与乙酸的体积比为3.5‑4.5:1。

7.根据权利要求1所述的一种埃洛石基印迹固载酶的制备方法,其特征在于,步骤(4)采用N,N'‑羰基二咪唑活化法对印迹HNTs进行改性。

8.根据权利要求1所述的一种埃洛石基印迹固载酶的制备方法,其特征在于,步骤(5)‑3

中CoCl2的摩尔体积为1 mol·m 。

9.根据权利要求1或8所述的一种埃洛石基印迹固载酶的制备方法,其特征在于,酯酶‑1 ‑1

的活性为0.1 u·mL ‑0.4 u·mL 。

10.一种根据权利要求1‑9中任一项所述的一种埃洛石基印迹固载酶的制备方法得到的埃洛石基印迹固载酶在环境污染物PAEs治理上的应用。