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专利号: 2019113888841
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.chi-miR-450-5p作为山羊卵泡成熟miRNA标志物的应用,其特征在于:所述的chi-miR-450-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述chi-miR-450-5p作为山羊卵泡成熟miRNA标志物的应用,其特征在于:所述的chi-miR-450-5p表达上调,提示山羊卵泡发育成熟。

3.根据权利要求1所述chi-miR-450-5p作为山羊卵泡成熟miRNA标志物的应用,其特征在于:所述的chi-miR-450-5p为成熟的chi-miR-450-5p。

4.根据权利要求1所述chi-miR-450-5p作为山羊卵泡成熟miRNA标志物的应用,其特征在于:所述的chi-miR-450-5p的筛选方法包括如下步骤:S1:采集发情处理后的山羊卵巢组织,分离出优势卵泡和小卵泡,分别提取RNA;

S2:采用步骤S1的RNA进行miRNA-seq,对差异表达的miRNA进行GO和KEGG富集分析,筛选出与细胞趋化因子通路相关的chi-miR-450-5p;

S3:将步骤S1的RNA反转录获得cDNA,采用荧光定量PCR对筛选出的chi-miR-450-5p进行验证,得到的数据采用统计学方法分析chi-miR-450-5p的相对表达量,与miRNA-seq结果进行比较。

5.根据权利要求4所述chi-miR-450-5p作为山羊卵泡成熟miRNA标志物的应用,其特征在于:步骤S3中所述的荧光定量PCR的反应体系为:2×SYBR Green Mix 10μL,正向引物0.5μL,反向引物0.5μL,cDNA 2μL,ddH2O补充至20μL;

步骤S3中所述的荧光定量PCR的反应条件为:95℃、10min;95℃、2s,60℃、20s,70℃、

10s,40个循环;默认溶解曲线生成;

步骤S3中所述的统计学方法为2^(-ΔΔCT)法。

6.一种检测山羊卵泡发育情况的试剂盒,其特征在于:包括荧光定量PCR反应体系、扩增权利要求1所述的chi-miR-450-5p和内参snRNA U6的引物对。

7.根据权利要求6所述的检测山羊卵泡发育情况的试剂盒,其特征在于:所述的荧光定量PCR反应体系为:2×SYBR Green Mix 10μL,正向引物0.5μL,反向引物0.5μL,cDNA 2μL,ddH2O补充至20μL。

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