1.一种可视化绿色荧光伪狂犬病毒的构建方法，其特征在于，在伪狂犬病毒的次要骨架蛋白的Met‑1/Gly‑2之间插入有荧光蛋白；所述构建方法是利用CRISPR/Cas9技术；

所述方法包括以下步骤：S1  .设计sgRNA靶标序列，并根据其合成互补引物序列，退火后连接入pCRISPR/Cas9载体，得到识别剪切VP24的CRISPR/Cas9质粒pCas9‑VP24；S2.以克隆载体为骨架载体，插入伪狂犬病毒VP24的Met‑1/Gly‑2两端的序列作为左右同源臂，左右同源臂间插入Thr‑Thr‑Ser‑Ala‑Thr和EGFP基因，构建重组载体pBSK‑UL26‑EGFP‑UL25；S3.

将重组载体pBSK‑UL26‑EGFP‑UL25、伪狂犬病毒和CRISPR/Cas9质粒pCas9‑VP24转染PK‑15细胞，通过克隆筛选，获得含EGFP标记蛋白的病毒株PRV‑VP24‑EGFP；步骤S1中，互补引物序列的核苷酸序列如SEQIDNO.1～2所示；所述左右同源臂间插入Thr‑Thr‑Ser‑Ala‑Thr和EGFP基因的核苷酸序列如SEQIDNO.9所示。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S2中，具体包括以下步骤：S21  .

分别使用核苷酸序列如SEQIDNO.3～4所示和核苷酸序列如SEQIDNO.5～6所示引物，以伪狂犬病毒DNA为模板，扩增同源左臂和同源右臂；S22.使用核苷酸序列如SEQIDNO  .7～8所示引物，以携带有EGFP基因的质粒为模板，扩增同源左右臂间插入的Thr‑Thr‑Ser‑Ala‑Thr和EGFP基因序列；S23.线性化克隆载体；S24.将S21、S22、和S23的产物混合反应，得到重组载体M‑pBSK‑UL26‑EGFP‑UL25。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤S24中，将S21、S22、和S23的产物混合的质量比为：50～200：50～200：50～200：25～100g。