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专利号: 2019112676592
申请人: 湖北大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2024-01-09
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种华中枸骨叶总黄酮纯化方法,其特征在于,所述华中枸骨叶总黄酮纯化方法包括以下步骤:步骤一,利用乙醇对华中枸骨叶进行提取得乙醇总提取物;

步骤二,称取华中枸骨叶乙醇总提取物干燥粉末,进行石油醚脱脂,得总黄酮干燥粗粉;

步骤三,利用大孔吸附树脂对总黄酮干燥粗粉进行吸附洗脱;

步骤四,再经凝胶sephdex LH-20色谱纯化;

步骤五,浓缩、真空干燥得干燥粉末即得纯化后的华中枸骨叶总黄酮。

2.如权利要求1所述的华中枸骨叶总黄酮纯化方法,其特征在于,步骤一具体包括:取华中枸骨叶10.0kg,粉碎,80%的乙醇40L冷浸提取3次,每次48h,合并提取液,减压回收乙醇至无醇味,低温真空干燥,得乙醇总提取物861.0g。

3.如权利要求1所述的华中枸骨叶总黄酮纯化方法,其特征在于,步骤二具体包括:以蒸馏水充分分散所述华中枸骨叶乙醇总提取物干燥粉末5.0g,置于250mL分液漏斗中,以等量的石油醚萃取3次,弃石油醚层,将水层减压回收多量的水,低温真空干燥,得总黄酮干燥粗粉。

4.如权利要求1所述的华中枸骨叶总黄酮纯化方法,其特征在于,步骤三具体包括:取D101大孔吸附树脂并对所述D101大孔吸附树脂进行预处理,称取预处理好的D101大孔吸附树脂各250g,装入色谱柱中,柱体积约300mL,径高比为1:8;取步骤二中得到的总黄酮干燥粗粉5.0g,用多量的水充分分散溶解,大孔吸附树脂柱色谱反复吸附,水洗脱至流出液近无色,用50%的乙醇洗脱5BV。

5.如权利要求4所述的华中枸骨叶总黄酮纯化方法,其特征在于,所述D101大孔吸附树脂预处理方法具体包括:用95%乙醇浸泡24小时,充分溶胀后,湿法装柱,继续用95%乙醇冲柱,断检查流出液,至与水混合不呈白色浑浊为止,以蒸馏水洗至无醇味,pH值为7。

6.如权利要求1所述的华中枸骨叶总黄酮纯化方法,其特征在于,步骤四具体包括葡聚糖凝胶Sephadex LH-20纯化,取经D101大孔吸附树脂优化工艺纯化的总黄酮干粉,用水溶解,经葡聚糖凝胶Sephadex LH-20色谱柱,甲醇进行洗脱,以1/3柱体积为1个流分,收集各个流分依次进行编号,并依次进行盐酸镁粉反应,待反应呈阴性时停止收集,确定甲醇洗脱量为3个柱体积,收集3BV甲醇洗脱液。

7.如权利要求1所述的华中枸骨叶总黄酮纯化方法,其特征在于,步骤五得总黄酮干燥粉末后,还需测定干粉质量及总黄酮的量,计算总黄酮含量以及转移率。

8.一种利用权利要求1~7任意一项所述华中枸骨叶总黄酮纯化方法制备的总黄酮。

9.一种利用权利要求8所述总黄酮制备的用于治疗抗类风湿性关节滑膜炎的药物。

10.一种用于测评权利要求8所述总黄酮体外抗RA关节滑膜炎症活性的方法,其特征在于,所述总黄酮体外抗RA关节滑膜炎症活性测评方法包括:以TNF-α诱导人关节滑膜成纤维细胞MH7A评价ICTF体外抗RA关节滑膜炎症活性,并进行试剂盒检测上清液中NO水平,RT-qPCR检测IL-1β、IL-6、IL-8mRNA的表达。