1.一种基于免疫印迹法鉴别皮革的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）取待测皮革样品，研磨成粉，以1:50‑70g/mL的浴比加入蒸馏水，浸泡20‑30h；

2）用碱土金属水解液调节pH值至碱性，并加热至沸腾，加热过程中不断慢速搅拌，在此状态下反应1 2 h；

~

3）趁热过滤，将滤液pH值调节至中性，过滤后，减压浓缩至粘稠状，烘干后粉碎，得到可溶性蛋白粉；

4）用蒸馏水清洗制胶架，在55‑65℃下干燥10‑20 min后取出，搭好制胶架后，检查是否漏水，如不漏水则进行后续制胶操作，制胶操作具体为：将分离胶用移液枪注射入两块玻璃板之间，然后取异丙醇注入至玻璃板间使其液面齐平；然后将玻璃板置于35‑40℃下15‑20 min；待分离胶凝固后，将异丙醇倒掉，然后再加入浓缩胶并立即插上梳子，再次将装置将玻璃板置于35‑40℃下10‑20 min，将制胶后的玻璃板放入电泳槽中进行检漏操作；放置时要短的玻璃板朝里，长的玻璃板朝外；然后拨去梳子形成泳道；制得中间包夹有若干泳道的两块玻璃板；

5）将可溶性蛋白粉溶解于CB溶液中制得浓度为8‑12 mg/mL的蛋白混合液，取2.5‑3.5 ul的还原型5XSDS上样缓冲液于试管中，然后加入蛋白混合液，在95‑100℃水浴中加热8‑12 min，离心处理；6）取上清液进行电泳操作，在泳道内加入上清液进行电泳，电泳完成后将玻璃板之间的胶剥离并用蒸馏水清洗，清洗后通过化学发光成像仪观察电泳结果；

7）观察后，裁剪一个PVDF膜，将其浸泡于甲醇中0.5‑1.5min激发，然后将PVDF膜和海绵滤纸浸泡至转移缓冲液中，进行三明治结构的搭建，然后进行转印，转印过程中用冰袋包裹于反应装置四周，转印电流为190‑210 mA，转印过程持续20‑40min；

8）将18‑22 mL封闭液倒在PVDF膜上，摇床封闭0.5‑1.5 h后倒掉，加入8‑12mL用TBST稀释好的一抗，一抗的抗原为鹿蛋白特征序列；将这种特征序列作为半抗原，和载体蛋白结合后进行动物免疫，得到蛋白序列抗体；一抗摇床孵育0.5‑1.5 h，然后用TBST清洗多次，每次用量18‑22 mL，摇床8‑12 min，清洗多次后，再加入8‑12 mL稀释后的二抗并孵育0.5‑1.5 h，孵育完成后用TBST清洗多次，最后将显色液均匀滴加在PVDF膜上，用锡箔纸包住避光3‑7 min，通过化学发光成像仪观察免疫结果，如果有阴影条带，则为真皮革，若无则为仿冒皮革。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）中，调节的pH值为7.1‑7.3。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6）中，电泳操作过程为：调节电压到75‑

85 V，电泳8‑12 min后将电压升至110‑130 V，等待溴酚蓝到达底部附近时，停止电泳。