1.一种雄鼠繁殖力综合评价方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)选择8‑9周龄、外表健康、反应灵敏、体重达标、毛色光亮和性器官发达的雄鼠;
(2)雄鼠进行单笼饲养,喂食钴60繁殖饲料,自由采食和饮水,保证光照10小时、黑暗14小时间隔;
(3)选择8周龄、外表健康、反应灵敏、体重达标、毛色光亮和性器官发达的雌鼠;
(4)雌鼠进行群居饲养,喂食钴60繁殖饲料,自由采食和饮水,保证光照10小时、黑暗14小时间隔;
(5)雌鼠进行阴道涂片,观察阴道细胞变化判断情期;
所述阴道涂片是指以左手拇指和食指轻轻抬起雌鼠尾巴,另外三个手指轻轻按压腰背部,翻起尾巴露出阴道口,当外阴肿胀时进行操作,右手持10μL枪吸取10‑20μL灭菌生理盐水反复清洗外阴,将流出的生理盐水吸入并滴到玻片上,自然干燥,95%酒精溶液中固定
10min,瑞士染液中染色5min,95%酒精脱色1‑2s,立即自来水缓缓冲洗干净,风干后观察,间情期:白细胞游离出阴道,图片中基本是染成深蓝色的小而圆的白细胞;动情前期:有核上皮细胞占优势,它们是单个的,有的呈片状,有少量白细胞;动情期:几乎全是无核的角化细胞,染成红色,没有白细胞;后情一期:出现成团块或成片的角化细胞,有时有极少量的白细胞;后情二期:角化细胞减少,出现有核上皮细胞,白细胞增多,联合阴道状态和阴道涂片的图片判断雌鼠发情期,挑选出发情期的雌鼠用于后续自然交配;
(6)发情期雌鼠与选育雄鼠合笼,同时确保10‑12小时的黑暗环境,使雌鼠与雄鼠1:1交配;
(7)合笼10‑12小时后,检查雌鼠阴道栓,记录阴道状态;
所述检查雌鼠阴道栓是指合笼10‑12小时后观察雌鼠阴道栓和阴道状态,阴道栓是淡黄色且呈栓塞状,阴道栓掉落翻看阴道口可观察到乳白色、淡黄色黏液或者半凝固固体在阴道口,此时阴道外周发红肿胀且开口大,若没有看到上述现象说明交配不成功;
(8)小心护理雌鼠和仔鼠,记录雌鼠妊娠天数、产仔数和胎儿存活数;
(9)记录交配后阴道状态、妊娠天数、产仔数和胎儿存活数四项鉴定指标变化情况,比对评判标准记录分数,将四项鉴定指标分数逐项累加,依照分数判断雄鼠繁殖力,评判标准、累加方法和评判结果如下:
1)雌鼠与雄鼠合笼自然交配前,需要有记录雌鼠生长发育到4‑5周时的情期状态,舍弃过早性成熟雌鼠,进行阴道涂片检测,确保雌鼠处于自然发情期,评判标准以分值计入数据,为0分、1分、2分和3分,0分表示观察现象与描述现象不符或指标值很低,1分表示观察现象与描述现象类似但不明显或指标值低,2分表示观察现象与描述现象吻合或指标值高,3分表示观察现象与描述现象吻合且特别明显显著或指标值很高;
2)阴道状态,阴道栓和阴道外周为观察指标:
0分表示没有阴道栓且阴道外周紧闭浅白,
1分表示乳白色、淡黄色黏液或者半凝固固体在阴道口,此时阴道外周发红肿胀且开口大,
2分表示淡黄色阴道栓堵在阴道口且阴道外周发红肿胀且开口大,
3分表示特别大的淡黄色阴道栓堵在阴道口,使得阴道外周发红特别肿胀且开口特别大;
3)妊娠天数为观察指标:
0分表示妊娠天数超过28天或者没有妊娠,
1分表示妊娠天数23到28天,
2分表示妊娠天数20到22天;
4)产仔数为观察指标:
0分表示没有产仔或者死胎或者产仔数为平均值的20%以下, 1分表示产仔数为平均值的20%‑100%之间,包括20%和100%,
2分表示产仔数高于平均值;
5)胎儿存活数为观察指标:
0分表示胎儿存活数为平均值的80%以下,
1分表示胎儿存活数为平均值的80%‑100%,包括80%和100%,
2分表示胎儿存活数为平均值100%;
6)统计指标,将各项指标累加分数,判断雄鼠繁殖力,0分为繁殖力极其低下雄鼠,检测合格基本指标8分为繁殖力强的优质雄鼠,8分以上为繁殖力超强的非常优质雄鼠,可以做种雄鼠。
2.根据权利要求1所述雄鼠繁殖力综合评价方法,其特征在于,步骤(1)所述雄鼠为远交系或近交系,雄鼠为8‑9周龄以上,外表健康、体型矫健且无明显伤痕,反应灵敏且四肢有力,体重达标是指选择的雄鼠体重大于或等于对应品系雄鼠平均体重,C57BL/6J雄鼠为23‑
25克,KM雄鼠为30‑32克,其他品系根据各自成年雄鼠平均体重选择,毛色光亮整齐均匀且无脱毛,性器官明显阴茎突出。
3.根据权利要求1所述雄鼠繁殖力综合评价方法,其特征在于,步骤(3)所述雌鼠与雄鼠相同品系,雌鼠为8周龄,外表健康、反应灵敏、毛色光亮整齐均匀且无脱毛和阴道口明显,体重达标是指选择的雌鼠体重大于或等于对应品系雌鼠平均体重,C57BL/6J雌鼠为20‑
23克,KM雌鼠为28‑30克,其他品系根据各自成年雌鼠平均体重选择,在雌鼠正常生长发育的4‑5周,每天检查雌鼠阴道状态,检查时左手大拇指和食指轻轻拉起雌鼠尾巴,另外三个手指轻轻按压背部,若有阴道外口四周发红和肿胀的,即做阴道涂片检测情期状态,舍弃过早性成熟或过早出现阴道红肿开口的雌鼠。
4.根据权利要求1所述雄鼠繁殖力综合评价方法,其特征在于,步骤(6)所述雌鼠与雄鼠1:1交配是指雄鼠不可1配多且交配后间隔4‑5天,必须把雌鼠放入雄鼠笼子中,确保合笼
10‑12小时的黑暗环境,小鼠黑暗环境中比较活跃,交配发生在黑暗环境后的6‑8小时。
5.根据权利要求1所述雄鼠繁殖力综合评价方法,其特征在于,步骤(8)所述小心护理雌鼠和仔鼠是指妊娠18天将雄鼠离笼单笼饲养,间隔4‑5天才可和母鼠合笼,雌鼠笼中放置杨木丝,并置于安静不受打扰的产房中,继续饲喂繁殖料21天,早、中、晚每天检查3次小鼠出生情况,由此统计雌鼠妊娠天数、产仔数,哺育21天后统计胎儿存活数。