1.一种基于聚多巴胺-二氧化钛复合材料修饰玻碳电极的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于:以mg和mL计,制备方法包括以下步骤:
1)聚多巴胺的制备:向容器中加入8~10ml无水乙醇和18~20ml去离子水,随后加入
0.898g/ml~0.907g/ml的500-700ul浓氨水;将所得混合溶液搅拌20-40min后,缓慢加入
45-55mg/ml的1.5-2.5ml多巴胺溶液;在常温下搅拌反应,将所得溶液离心后,取固体即为聚多巴胺;
2)纳米二氧化钛的制备:取20-30ml无水乙醇,依次加入0.8-1.2ml正丁醇、0.8-1.2ml聚乙二醇、0.35-0.40ml氢氟酸、0.8-1.2ml乙二醇和0.4-0.6ml去离子水,搅拌15~20min,配制成溶液A;再取2.5-3.5ml钛酸四丁酯,加入8-12ml无水乙醇,搅拌15~20min配成溶液B;将溶液B以3.5-4.5ml/h的注射速度注入溶液A,同时剧烈搅拌溶液A,待注射完毕后继续搅拌3~5h;将搅拌好的溶液在140-160℃下并辅搅拌3.5~4h,至反应结束,分别用去离子水、正丁醇和无水乙醇离心洗涤,将洗净所得的产物烘干,研磨后煅烧,得到纳米二氧化钛;
3)玻碳电极预处理:工作玻碳电极在麂皮上用纳米级氧化铝和去离子水进行打磨抛光;然后用无水乙醇浸泡超声清洗,最后用去离子水超声清洗;
4)在电极表面滴加2-4ul浓度为8-12ug/L的聚多巴胺溶液,烘干后用PBS缓冲液洗净,继续滴加2-4ul浓度为8-12ug/L的纳米二氧化钛溶液于电极表面,烘干后即制得聚多巴胺/二氧化钛GCE电极;
5)清洗烘干电极,室温干燥后在电极表面滴加18-22μL 0.04-0.06M的3-羟基丙酸水溶液,孵育0.5-1.5h形成饱和3-羟基丙酸单层,然后用PBS缓冲液彻底清洗,将修饰有3-羟基丙酸的电极在含有0.04-0.06M EDC/0.02-0.04M N-羟基琥珀酰亚胺的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐缓冲液中孵育0.5-1.5h,将3-羟基丙酸的末端羧基转化为活性N-羟基琥珀酰亚胺酯;再取4-6ul 8-12ug/mL的丝素蛋白抗体溶液,滴涂至电极表面,室温下晾干,用PBS缓冲液洗净未固定的抗体,得抗体/聚多巴胺/二氧化钛/GCE修饰电极;随后,用BSA溶液封闭20-40min,以封闭电极表面可能存在的非特异性结合位点,取出后用PBS缓冲液洗净,晾干,得丝素蛋白电化学免疫传感器。
2.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤1)中,加入多巴胺溶液后的搅拌时间为25-35h,搅拌时避光,离心条件为9000-11000rpm,4-6min。
3.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤2)中,将洗净所得的产物在55-65℃下烘干,研磨1~2h后在420-440℃煅烧20-40min,得到纳米二氧化钛。
4.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤3)中,用无水乙醇浸泡超声清洗8-12min;最后用去离子水超声清洗8-12min。
5.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤4)中,在室温下烘干。
6.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤4)至步骤6)中,所述PBS缓冲液的pH=7.4。
7.如权利要求1所述的丝素蛋白电化学免疫传感器,其特征在于,步骤5)中,所述BSA溶液的浓度为0.8-1.2wt%。