1.一种基于DNA步行器诱导构象转化和信号放大的电化学发光传感器,其特征是:利用亲和素标记CdS:Mn量子点构建ECL信号探针,通过目标GSH将MnO2还原生成的Mn2+催化DNA酶循环放大反应,产生DNA产物。DNA产物驱动电极上内切酶辅助的DNA步行器诱导构象转换,结合CdS:Mn-亲和素信号探针,构建了ECL传感器。
2.一种制备权利要求1所述的基于DNA步行器诱导构象转化和信号放大的电化学发光传感器的方法和应用,其特征方法由下列步骤组成:步骤1.CdS:Mn-亲和素信号探针的合成:
取100微升CdS:Mn QDs,加入10μL 0.1M EDC和10μL 0.025M NHS活化1小时,加入20μL
1mg/mL亲和素SA于37℃反应6h。
步骤2.GSH将MnO2还原成Mn2+:
20μL 不同浓度的GSH与20μL MnO2纳米片混合涡旋3min,离心5min,取上清液得到不同
2+
浓度Mn 的溶液。
步骤3.Mn2+催化的DNA酶循环放大反应:
20mg EDC和10mg NHS加入到50μL的COOH-MB溶液中,37℃下活化1h,加入50μL S1(1μM)
37℃反应6h,再加入25μL S2(1μM)反应2h形成DNA酶。磁分离去除多余的DNA,分散到170μL PBS。最后,取5μL上述Mn2+的溶液与20μL MB-S1-S2溶液混合后于37℃反应80min。磁分离后,收集上清液备用。
步骤4.传感器的构建和检测。
ITO电极清洗晾干。Arm和Blocker(A/B)于37℃下反应2h保护Arm,然后6μL退火的H1和A/B按比例混合滴到纳米金修饰的ITO电极,37℃反应过夜,用1mM MCH封板2h。电极冲洗后,
6μL步骤3收集的上清液和2U Nt.BbvCI加入电极反应体系中于37℃反应2h。最后与CdS:Mn-SA探针于37℃反应1h。
3.根据权利要求2所述的谷胱甘肽GSH的检测方法,其特征是:所述的电化学发光测试是将表面进行反应完成的电极作为工作电极,三电极体系中检测ECL信号。于100mM PBS(pH
7.4,含有50mM K2S2O8)进行ECL检测,PMT是-800V,电位:0~-1.5V,扫速:100mV s-1。