1.一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,包括如下步骤:(1)取鱼头部软组织,捣碎后作为试样加入提取液加热提取得粗提液;
(2)待粗提液冷却至室温,冷冻离心后取上清液用微孔滤膜过滤;
(3)用高效液相色谱测定上述滤液中的肌肽和鹅肌肽的含量,所述高效液相色谱的色谱柱中使用负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15作为填料。
2.根据权利要求1所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(3)中所述负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15的制备方法如下:A)将P123和NaF溶解在1-2mol/L的盐酸溶液中,35-45℃下搅拌至完全溶解;
B)向上述溶液中逐滴加入氰基乙基三乙氧基硅烷,搅拌20-30min后再逐滴加入正硅酸乙酯,35-45℃下搅拌6-8h;
C)向上述溶液中加入1-2mol/L的NaAlO2的盐酸溶液,35-45℃下搅拌20-30h;
D)用氨水将溶液pH调节到1.6-1.7后,移入特氟龙内衬反应釜,并将反应釜置于100-
200℃烘箱中活化36-48h;
E)将反应釜从烘箱中取出,将至室温后用氨水将溶液的pH调节至5.5-6.5,再置于100-
200℃烘箱中活化36-48h;
F)过滤后将产物用蒸馏水和无水乙醇洗涤后,60-100℃下干燥8-12h,得到氰基化Al-SBA-15;
G)将氰基化Al-SBA-15加入到质量分数为44%-47%的硫酸溶液中,90-100℃下搅拌反应
24-36h,过滤、洗涤后,70-90℃下干燥8-12h,得到羧基化Al-SBA-15;
H)将羧基化Al-SBA-15分散在0.1-0.2mol/L的CuSO4溶液中,搅拌反应20-30h后抽滤,所得产物洗涤后在50-70℃下干燥8-10h;
I)将所得产物在马弗炉中500-600℃下焙烧4-5h,得到所述负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15。
3.根据权利要求2所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤A)-步骤C)中,溶液中NaF、P123、氰基乙基三乙氧基硅烷、正硅酸乙酯、NaAlO2、HCl的质量比为1:(170-180):(40-45):(500-550):(20-50):(2600-2800)。
4.根据权利要求1所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(1)中所述提取液为蒸馏水、0.1mol/L NaOH溶液、0.6mol/L 盐酸中的一种。
5.根据权利要求1或4所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(1)中加入提取液中的试样质量为(0.8-1.2g)/10mL。
6.根据权利要求1所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(1)中加热提取的温度为75-85℃,提取时间10-20min。
7.根据权利要求1所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(2)中冷冻离心时的温度为0-4℃,时间10-20min,微孔滤膜孔径为0.45μm。
8.根据权利要求1或2所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(3)中采用匀浆法将3.8-4g负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15填料装入250mm×4.6mm的不锈钢柱管中得到所述色谱柱,匀浆法中的溶液为正己烷-异丙醇(V:V=90:10),装柱压力为40-50MPa。
9.根据权利要求1或2所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(3)中高效液相色谱法测定时,以pH为8-9的20mmol/L磷酸盐缓冲液和甲醇为流动相,等梯度洗脱,其中甲醇的质量分数为1-5%。
10.根据权利要求1或2所述的一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法,其特征是,步骤(3)中高效液相色谱法测定时,使用紫外检测器检测,波长230nm,流速
1.0mL/min,柱温35℃。