1.弧菌作为海洋产电菌的产电方法,其特征是:包括:
本发明菌株弧菌的筛选:(1)菌株分离:无菌采集舟山海域潮间带表面沉积物,加无菌水振荡,过滤后滤液为接种物,富集培养1‑2个月,涂布于琼脂平板,置于厌氧培养箱,30℃培养,待菌落直径0. 5 cm时取典型菌落接种于富集培养基中再培养,菌落长成后再次涂布分离,如此反复几次,得到1批纯种菌株;(2)产电菌的筛选:对分离得到的纯菌株的菌液进行循环伏安CV扫描来确定所测菌株是否具有电化学活性,所接菌种先培养至对数末期,用分光光度计测D600,冷冻离心后用产电基础培养基重新悬浮,加入阳极室,阴极加入等量的产电基础培养基即可,利用多通道万用数字电表测量电压;(3)形态特征观察:弧菌为革兰氏阴性杆菌,呈弧状、杆状、丝状,无芽孢,该菌嗜盐畏酸,对酸较敏感,在固体培养基上菌落常隆起,圆形,表面光滑,湿润;(4)16S rDNA系统进化分析:用细菌DNA提取试剂盒提取弧菌(Vibrio parahaemolyticus N1A_BW)的全基因,然后以提取的基因为模板,采用细菌16S rDNA通用引物27F(5'‑ AGAGTTTGATCCTGGCTCAG ‑3')和1492R(5 '‑ TACGGTTACCTTGTTACGACTT ‑3')进行片段扩增;(5)产电考察步骤为:
a.制备弧菌作为微生物燃料电池接种物;
b.制备阴极液和含燃料的阳极液;
c.往微生物燃料电池阳极室中加入微生物燃料电池接种物,连接外电路,进行产电检测;d.弧菌接种于产电基础培养基中,在30 ℃,100rpm培养24h,采用4000rpm离心5min收集菌体,得到微生物燃料电池接种物;
d.步骤b中的燃料为乙酸钠,阳极液为产电基础培养基和10 mM 乙酸钠的混合液,所述步骤b中的阴极液为产电基础培养基和50 mM 铁氰化钾的混合液;
e.所述步骤c中微生物燃料电池接种物的量为0. 025g/mL阳极液。