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专利号: 2019100226640
申请人: 辽宁大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,包括如下步骤:

1)制备提取物:由花楸果制备粗提液,减压浓缩,冷冻干燥,得花楸果粗提物;具体包括如下步骤:

1.1)将花楸果捣碎,按料液比1 kg : 5 L~1 kg : 10 L,加入质量浓度为60%~90%的乙醇或甲醇水溶液超声提取,提取温度为35~45℃,提取时间为30~60 min,适时搅拌,过滤,得滤液;

1.2)将所得滤液,45℃下减压浓缩,冷冻干燥,得花楸果粗提物;

2)初步纯化:利用聚酰胺色谱柱对步骤1)得到的花楸果粗提物,以乙醇为洗脱液进行梯度洗脱,得到不同梯度的洗脱物;具体包括如下步骤:

2.1)将步骤1)所得花楸果粗提物溶于水中,以上样浓度15~25 mg/mL加入到聚酰胺色谱柱中,静止2~3 h,先用蒸馏水洗脱,弃去洗脱液,然后依次使用质量浓度为40~50%乙醇和质量浓度为60~70%乙醇以3 mL/min的流速进行洗脱,分别收集40~50%乙醇洗脱液和60~70%乙醇洗脱液;

2.2)分别对40~50%乙醇洗脱液和60~70%乙醇洗脱液进行减压浓缩、冷冻干燥,由

40~50%乙醇洗脱液得A组分样品,由60~70%乙醇洗脱液得B组分样品;

3)分离化合物:利用高速逆流色谱对步骤2)得到的不同梯度的洗脱物进行分离纯化,得到多酚化合物,具体包括如下步骤:

3.1)将乙酸乙酯、正丁醇和水,按体积比2~4 : 0.5~2 : 4~6配成混合溶液,在分液漏斗中充分振摇后静止分层,取上层作为固定相,下层作为流动相;设置高速逆流色谱仪恒温器温度25℃,然后泵入固定相,待固定相充满高速逆流色谱柱后,调节主机转速为800~

900 r/min,泵入流动相,检测波长为280 nm,流动相流速为1.5~3 mL/min;取A组分样品,按体积比1:0.5~2的固定相和流动相,混合均匀,配成浓度为5~20 mg/mL的样品溶液,进样,观察色谱峰,待目标峰出现时收集馏分,减压浓缩去除有机溶剂,冷冻干燥得新绿原酸、绿原酸、槲皮素‑3‑O‑(6″‑α‑L‑鼠李糖基‑4'''‑α‑L‑鼠李糖基)‑β‑D‑葡萄糖苷和芦丁;

3.2)将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水,按体积比0.5~1 : 2~4 : 0.5~1 : 2~4配成混合溶液,在分液漏斗中充分振摇后静止分层,取上层作为固定相,下层作为流动相;设置高速逆流色谱仪恒温器温度25℃,然后泵入固定相,待固定相充满高速逆流色谱柱后,调节主机转速为800~900 r/min,泵入流动相,检测波长为330 nm,流动相流速为1.5~3 mL/min;取B组分样品溶解于流动相中,配成浓度为5~15 mg/mL的样品溶液,进样,观察色谱峰,待目标峰出现时收集馏分,旋转浓缩去除有机溶剂,冷冻干燥得3,5‑O‑双咖啡酰基奎宁酸。

2.根据权利要求1所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,步骤3.1)中,按体积比:乙酸乙酯:正丁醇:水=3.5:1.5:5,乙酸乙酯:正丁醇:水=3.5:1:5或乙酸乙酯:正丁醇:水=3:1:5。

3.根据权利要求1所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,步骤3.2)中,按体积比:正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3:1:3.5,正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3.5:1:3.5或正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3:1:4。

4.根据权利要求1‑3任一项所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法,其特征在于,所述的花楸果来源于百华花楸。