1.一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,所述的蛋白酶缺失微生物是枯草芽孢杆菌WB800,保藏于江南大学中国高校工业微生物资源和信息中心,CICIM编号为B0132,其特征在于,所述方法包括以下步骤:S1:菌种活化
将所述枯草芽孢杆菌WB800接种于活化培养基平板,置于培养箱内倒置培养以活化菌株;
S2:种子培养
挑取步骤S1活化后的单菌落接种于种子培养基,置于摇床震荡培养至种子液的OD600 达到0.6 1.0;
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S3:发酵产酶
将步骤S2中的种子液接入发酵培养基中,置于摇床震荡培养;
S4:离心分离
将步骤S3发酵后的产物进行离心,收集上清液,获得壳聚糖酶的粗酶液。
2.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,其特征在于:所述种子液按体积百分比1.5 3% 的接种量接入所述发酵培养基中。
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3.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,其特征在于,步骤S1中所述活化培养基的配方为:胰蛋白胨8 12g/L,酵母提取物3 7g/L,氯化钠7~ ~ ~
11g/L,琼脂粉15 20g/L,用氢氧化钠调节所述活化培养基的pH为7.2 7.6。
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4.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,其特征在于,步骤S2中所述种子培养基的配方为:胰蛋白胨8 12g/L,酵母提取物3 7g/L,氯化钠7~ ~ ~
11g/L,用氢氧化钠调节所述种子培养基的pH,使其达到7.2 7.6。
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5.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,其特征在于,步骤S3中所述发酵培养基的配方为:壳寡糖20 30g/L,胰蛋白胨9 11g/L,酵母提取物4~ ~ ~
6g/L,氯化钠9 11g/L,用氢氧化钠调节所述发酵培养基的pH,使其达到7.2 7.6。
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6.根据权利要求5所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,其特征在于:所述壳寡糖是聚合度为2 10的壳聚糖部分水解的产物。
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7.根据权利要求1 6中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚~糖酶的方法,其特征在于:步骤S1中,所述菌种活化的培养温度为35 39℃,时间为12 24h。
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8.根据权利要求1 6中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚~糖酶的方法,其特征在于:步骤S2中,所述种子培养的温度为35 39℃,时间为12 16h,转速~ ~为180 220 r/min。
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9.根据权利要求1 6中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚~糖酶的方法,其特征在于:步骤S3中,所述发酵产酶的温度为35 39℃,时间为25 30h,转速~ ~为180 220 r/min。
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10.根据权利要求1 6中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳~聚糖酶的方法,其特征在于:步骤S4中,所述离心分离的时间为10 20min,转速为3000 5000 ~ ~r/min。