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专利号: 2018115884022
申请人: 江西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,所述的蛋白酶缺失微生物是枯草芽孢杆菌WB800,保藏于江南大学中国高校工业微生物资源和信息中心,CICIM编号为B0132,其特征在于,所述方法包括以下步骤:S1:菌种活化

将所述枯草芽孢杆菌WB800接种于活化培养基平板,置于培养箱内倒置培养以活化菌株;

S2:种子培养

挑取步骤S1活化后的单菌落接种于种子培养基,置于摇床震荡培养至种子液的OD600 达到0.6 1.0;

~

S3:发酵产酶

将步骤S2中的种子液接入发酵培养基中,置于摇床震荡培养;

S4:离心分离

将步骤S3发酵后的产物进行离心,收集上清液,获得壳聚糖酶的粗酶液。

2.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,其特征在于:所述种子液按体积百分比1.5 3% 的接种量接入所述发酵培养基中。

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3.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,其特征在于,步骤S1中所述活化培养基的配方为:胰蛋白胨8 12g/L,酵母提取物3 7g/L,氯化钠7~ ~ ~

11g/L,琼脂粉15 20g/L,用氢氧化钠调节所述活化培养基的pH为7.2 7.6。

~ ~

4.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,其特征在于,步骤S2中所述种子培养基的配方为:胰蛋白胨8 12g/L,酵母提取物3 7g/L,氯化钠7~ ~ ~

11g/L,用氢氧化钠调节所述种子培养基的pH,使其达到7.2 7.6。

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5.根据权利要求1所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,其特征在于,步骤S3中所述发酵培养基的配方为:壳寡糖20 30g/L,胰蛋白胨9 11g/L,酵母提取物4~ ~ ~

6g/L,氯化钠9 11g/L,用氢氧化钠调节所述发酵培养基的pH,使其达到7.2 7.6。

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6.根据权利要求5所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚糖酶的方法,其特征在于:所述壳寡糖是聚合度为2 10的壳聚糖部分水解的产物。

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7.根据权利要求1 6中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚~糖酶的方法,其特征在于:步骤S1中,所述菌种活化的培养温度为35 39℃,时间为12 24h。

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8.根据权利要求1 6中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚~糖酶的方法,其特征在于:步骤S2中,所述种子培养的温度为35 39℃,时间为12 16h,转速~ ~为180 220 r/min。

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9.根据权利要求1 6中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳聚~糖酶的方法,其特征在于:步骤S3中,所述发酵产酶的温度为35 39℃,时间为25 30h,转速~ ~为180 220 r/min。

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10.根据权利要求1 6中任意一项权利要求所述的一种利用蛋白酶缺失微生物生产壳~聚糖酶的方法,其特征在于:步骤S4中,所述离心分离的时间为10 20min,转速为3000 5000 ~ ~r/min。