1.一种固定化蔗糖磷酸化酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)以氨基化树脂LX-1000EA或LX-1000HA为固定化载体,加入缓冲液后,在一定的温度下震荡,静置过滤后加到戊二醛溶液中,继续在同样的温度下震荡,洗去残留的戊二醛,过滤得到处理后的氨基化树脂LX-1000EA或LX-1000HA;
(2)在步骤(1)处理后的氨基化树脂LX-1000EA或LX-1000HA中加入蔗糖磷酸化酶,震荡固定,得到的LX-1000EA固定化SPase或LX-1000HA固定化SPase。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述蔗糖磷酸化酶为枯草芽孢杆菌经发酵培养制得的。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述发酵培养是以枯草芽孢杆菌SPase/pBSMuL3为生产菌株,在LB培养基中35~40℃培养8~10h,然后转接至TB发酵培养基中25~
35℃培养45~50h。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
(1)将产蔗糖磷酸化酶的枯草芽孢杆菌经发酵培养,离心收集上清,制得蔗糖磷酸化酶粗酶液;
(2)以5~15g氨基化树脂LX-1000EA或LX-1000HA为固定化载体,加入35~45mL、0.1M、pH 8的PBS缓冲液,在25~28℃温度下,200rpm震荡15min后在室温静置0.5~1.5h,用滤纸过滤后加入45~55ml的2%戊二醛中,在25~28℃温度下,200rpm震荡4~6h,用蒸馏水洗3次,洗去残留戊二醛,过滤得到处理后的氨基化树脂LX-1000EA和LX-1000HA;
(3)称取1g步骤(2)中处理过的氨基化树脂LX-1000EA或LX-1000HA,加入步骤(1)中得到的蔗糖磷酸化酶,加酶量为4~19U/g,于25~28℃,100rpm震荡固定4~24h,得到LX-
1000EA固定化SPase和LX-1000HA固定化SPase。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述加酶量为4U/g、6U/g、7U/g、9U/g、11U/g或19U/g。
6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述固定时间为4h、8h、12h、16h、20h或
24h。
7.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述戊二醛为40~60ml的1~5%戊二醛。
8.根据权利要求1-4任一所述固定化酶方法得到的固定化蔗糖磷酸化酶。
9.一种应用权利要求7所述的固定化蔗糖磷酸化酶制备曲二糖的方法,其特征在于,将固定化蔗糖磷酸化酶加入到5~15mL含蔗糖和果糖的底物溶液中,在45~55℃、80~120rpm的条件下反应45~50h。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述底物溶液是用pH6.5~7.5的MOPS缓冲液配置0.5M葡萄糖和0.5M蔗糖得到的。