欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2018114934664
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种培育对RNA病毒的抵御能力提高的单子叶植物的方法,其特征在于,包括以下步骤:S 11从待抵御的RNA病毒的基因组序列中选取若干靶序列,针对各靶序列,分别设计合成与所述靶序列反向互补的DNA片段,所述靶序列为符合5’-NX-3’序列排列规则的序列,其中,N表示A、G、C、U中的任一种,25≤X≤30,且X为整数,NX表示X个连续的核糖核苷酸;

S 12将步骤S 101中获得的若干个所述DNA片段分别构建到用于表达CRISPR/Cas13a核酸酶的载体中,得到若干个重组载体;

S 1将若干个所述重组载体分别导入受体植物,从导入所述重组载体的受体植物中获得对RNA病毒抵御能力提高的植物,所述RNA病毒包括双链RNA病毒和单链RNA病毒。

2.根据权利要求1所述的培育对RNA病毒的抵御能力提高的单子叶植物的方法,其特征在于,在S102中,所述重组载体能转录向导RNA和表达LshCas13a蛋白;所述向导RNA为由crRNA和tracrRNA通过碱基配对结合而成的具有回文结构的RNA;所述crRNA含有由所述DNA片段转录所得的RNA片段。

3.一种增强单子叶植物抵御RNA病毒侵染的方法,其特征在于,包括如下步骤:S 21按照包括如下步骤的方法获得目的DNA片段;

S 211从待抵御的RNA病毒的基因组序列中选取若干靶序列,针对各靶序列,分别设计合成与所述靶序列反向互补的DNA片段;

所述靶序列为符合5’-NX-3’序列排列规则的序列,其中,N表示A、G、C、U中的任一种,25≤X≤30,且X为整数,NX表示X个连续的核糖核苷酸;

S 212将步骤S 211中获得的若干个所述DNA片段分别构建到用于表CRISPR/Cas13a核酸酶的载体中,得到若干个重组载体;

S 213将若干个所述重组载体分别导入受体植物1,从导入所述重组载体的受体植物1中获得对所述RNA病毒抵御能力提高的植物,记为目的植物;

在所述目的植物中,被导入的所述重组载体上携带的所述DNA片段记为目的DNA片段;

S 22按照步骤S 212和S 213的方法,将所述目的DNA片段导入所述用于表达CRISPR/Cas13a核酸酶的载体中,将所得重组载体导入受体植物2,从而提高所述受体植物2对所述RNA病毒的抵御能力;

所述RNA病毒包括双链RNA病毒和单链RNA病毒。

4.根据权利要求3所述的增强单子叶植物抵御RNA病毒侵染的方法,其特征在于,所述重组载体能转录向导RNA和表达LshCas13a蛋白;所述向导RNA为由crRNA和tracrRNA通过碱基配对结合而成的具有回文结构的RNA;所述crRNA含有由所述DNA片段转录所得的RNA片段。

5.根据权利要求3所述的增强单子叶植物抵御RNA病毒侵染的方法,其特征在于,所述受体植物1和所述受体植物2为同一种受体植物,或所述受体植物1和所述受体植物2为不同种受体植物。

6.根据权利要求1或3所述的方法,其特征在于,所述用于表达CRISPR/Cas13a核酸酶的载体为pCR12载体,所述重组载体为由所述pCR12载体的两个酶切位点BsaI之间插入所述DNA片段后得到的重组质粒。

7.根据权利要求1-5中任一所述的方法,其特征在于,所述X为28。

8.根据权利要求1-5中任一所述的方法,其特征在于,所述植物为单子叶植物。

9.根据权利要求1-5中任一所述的方法,其特征在于,所述RNA病毒为双链RNA病毒。

10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述双链RNA病毒为南方水稻黑条矮缩病毒。