1.一种基于Western Blot测定古遗址中蚕丝蛋白微痕迹的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取2.5‑3.5mg古遗址中蚕丝蛋白微痕迹，用乙醇水溶液对其常温浸泡25‑35min，然后离心处理，移去上清液，下层物质于通风处晾干；

2）向晾干后的样品中加入100‑200µL的RIPA裂解液，震荡混匀，在60‑70℃下裂解10‑

20min，期间震荡3‑5次；

3）充分裂解后，向溶液中加入4‑6wt%的NaCl溶液100‑150µL，于‑25℃至‑15℃下静置8‑

12min析出蚕丝蛋白，离心处理；

4）移上清液到另一离心管中，重复步骤3）至少两次，然后用乙醇水溶液分别洗涤多次离心后所得的蛋白沉淀，震荡均匀后将多个离心管内样品合为一管，离心处理，移去上清液，通风晾干；

5）向步骤4）所得蛋白沉淀中加入1‑2µL的DNA酶，1‑2µL的RNA酶以及35‑45µL体积比为

1:7‑9:1‑3的CaCl2:H2O:ethanol溶液，于60‑70℃孵育8‑12min，获得蚕丝蛋白微痕迹溶液；

6）按重量比1：1‑2向蚕丝蛋白微痕迹溶液中加入叠氮化合物缓冲液，在1‑5℃下轻微震荡过夜，得到叠氮化合物标记的蚕丝蛋白；

7）在1mL的PBS缓冲液中加入1mg的NHS‑三芳基膦，0.5mL的N，N‑二甲基甲酰胺和20mg的HRP标记的羊抗兔抗体，将所得混合物室温震荡1‑3h，然后过30kDa截留分子量的柱纯化，获得三芳基膦标记与HRP标记的羊抗兔抗体；

8）采用TGX快速免染制胶试剂盒制备SDS‑PAGE凝胶；对抗桑蚕丝素蛋白抗体进行跑电泳测试，使用4‑6µL未染marker作为蛋白分子量标准物，在浓缩胶中控制电压80v，在分离胶中控制电压120v，待溴酚蓝前沿到达凝胶底部停止电泳，在化学发光成像仪中可观察电泳结果；紧接着将电泳分离之后的抗体在300mA、冰水浴条件下50‑70min转印到聚偏氟乙烯膜上，在化学发光成像仪中可观察转印结果；在室温摇床上使用20‑30mL的0.4‑0.6wt%的脱脂奶粉溶液封闭聚偏氟乙烯膜上的非特异性结合点，封闭时间控制在1‑2h；待封闭结束后，使用步骤5）所获得的蚕丝蛋白微痕迹溶液点到聚偏氟乙烯膜上并室温孵育1‑2h，使用标准的蚕丝蛋白溶液作为阳性对照，缓冲液作为阴性对照；孵育结束后，使用缓冲液洗涤2‑4次，每次4‑6min，紧接着加入20‑30mL的三芳基膦标记与HRP标记的羊抗兔抗体，保持在室温摇床上孵育1‑2h，然后再次使用缓冲液洗涤2‑4次，避光向聚偏氟乙烯膜上加入0.8‑1.2mL显色液，反应4‑6min后移至化学发光成像仪中观察免疫结果；

若检测到条带则证实所提取的样品由桑蚕丝制作而成，若没有检测到条带则说明所提取的样品不是由桑蚕丝制作而成。

2.如权利要求1所述的一种基于Western Blot测定古遗址中蚕丝蛋白微痕迹的方法，其特征在于，步骤1）中，所述乙醇水溶液浓度为70‑80wt%，离心速率为500‑1000r/min，离心时间为1‑3min。

3.如权利要求1所述的一种基于Western Blot测定古遗址中蚕丝蛋白微痕迹的方法，其特征在于，步骤3）中，离心速率为10000‑15000r/min，离心时间3‑5min。

4.如权利要求1所述的一种基于Western Blot测定古遗址中蚕丝蛋白微痕迹的方法，其特征在于，步骤4）中，所述乙醇水溶液浓度为70‑80wt%，离心速率为10000‑15000r/min，离心时间3‑5min。

5.如权利要求1所述的一种基于Western Blot测定古遗址中蚕丝蛋白微痕迹的方法，其特征在于，步骤6）中，所述叠氮化合物缓冲液包括：20mM的4‑羟乙基哌嗪乙磺酸，50mM的氯化钠，9mM的氯化锰和质量分数为1.5‑2.5%的乙基苯基聚乙二醇。

6.如权利要求1所述的一种基于Western Blot测定古遗址中蚕丝蛋白微痕迹的方法，其特征在于，步骤8）中，所述缓冲液由50mL的1M，pH=7.5的Tris·HCl，8g NaCl，0.2g KCl和

0.5mL吐温混合后加蒸馏水定容至1L配制而成。

7.如权利要求1所述的一种基于Western Blot测定古遗址中蚕丝蛋白微痕迹的方法，其特征在于，步骤8）中，采用TGX快速免染制胶试剂盒制备SDS‑PAGE凝胶，首先将分离胶A液、分离胶B液、10%APS、四甲基乙二胺按照1：1：0.01：0.001的重量比混合，注入搭好的两玻璃板之间，加入1mL异丙醇，置于37℃干燥箱中10min待分离胶凝固，倒掉异丙醇；然后将浓缩胶A液、浓缩胶B液、10%APS、四甲基乙二胺按重量比1:1:0.01:0.002混合，注入两块玻璃板之间至液体溢出，最后将梳子插入两块玻璃板之间放于37℃干燥箱中10min备用。