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专利号: 2018111194846
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2025-03-12
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的重组菌,其特征在于,所述重组菌是以大肠杆菌为宿主,双质粒表达系统表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶、亮氨酸脱氢酶,所述双质粒表达系统包括PETDuet-1质粒和pRSFDuet-1质粒;所述PETDuet-1质粒用于表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶,所述pRSFDuet-1质粒用于表达亮氨酸脱氢酶;所述甲酸脱氢酶、苏氨酸脱氨酶在PETDuet-1质粒上顺次连接;所述苏氨酸脱氨酶选自大肠杆菌,所述亮氨酸脱氢酶选自苏云金芽孢杆菌;所述甲酸脱氢酶选自假丝酵母;所述甲酸脱氢酶经过密码子优化,优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示,氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示;所述苏氨酸脱氨酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:5;所述亮氨酸脱氢酶氨基酸序列为SEQ ID NO:6。

2.根据权利要求1所述的一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的重组菌,其特征在于,所述宿主为E.coli BL21。

3.一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的方法,其特征在于,所述方法利用权利要求1~2任一所述的重组菌将底物转化为L-2-氨基丁酸,并偶联辅酶再生体系。

4.根据权利要求3所述的一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的方法,其特征在于,所述辅酶再生体系以甲酸铵为底物,通过甲酸脱氢酶将NAD+转化为NADH的辅酶再生系统。

5.根据权利要求4所述的一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的方法,其特征在于,所述底物中L-苏氨酸浓度为30~40g/L,甲酸铵浓度为10~30g/L,NAD+浓度为0.4~1.0g/L,所述重组菌经培养后以菌液的形式添加,转化温度为30~40℃,转化pH为7.0~8.5。

6.根据权利要求5所述的一种转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸的方法,其特征在于,所述菌液的制备方式为离心收集菌体后溶于pH为7.0~8.5的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液,菌液的添加量为30~50g/L。

7.权利要求1-2任一所述的重组菌在转化L-苏氨酸生产L-2-氨基丁酸中的应用。