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专利号: 2018107803396
申请人: 杭州园泰生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-26
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种生产类胡萝卜素的方法,其包括如下步骤:

将复合微生物培养物离心,弃上清,收集菌体,然后添加丙酮,进行超声破壁,再静置

30min,然后离心,收集上清液和沉淀,往沉淀中添加相同体积的丙酮,采用超声处理,收集上清液;合并两次上清液,然后用旋转蒸发器低温蒸干,残留物用乙醚溶解,然后加入KOH甲醇溶液,静置10-30min,再添加NaCl溶液使溶剂分层,收集上层乙醚相,将乙醚相蒸干,即得类胡萝卜素产品。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

将复合微生物培养物于8000rpm、4℃条件下离心20min,弃上清,收集菌体,然后按照

1kg菌体:1-1.5L丙酮的量添加丙酮,超声破壁,超声功率为300W,每次超声时间为10s,间歇时间为10s,总超声时间为30min,再静置30min,然后5000rpm离心5min,收集上清液和沉淀,往沉淀中添加相同体积的丙酮,采用超声处理15min,超声功率为300W,每次超声时间为

10s,间歇时间为10s,然后5000rpm离心3min,收集上清液;合并两次上清液,然后用旋转蒸发器低温蒸干,残留物用乙醚溶解,然后加入五分之一体积的质量分数为30%的KOH甲醇溶液,静置10-30min,再添加5%的NaCl溶液使溶剂分层,收集上层乙醚相,将乙醚相蒸干,即得类胡萝卜素产品。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,复合微生物培养物包括枯草芽孢杆菌、荚膜红假单胞菌以及粘红酵母菌。

4.根据权利要求3所述的复合微生物培养物,其特征在于,所述复合微生物培养物按照如下步骤制备而得:步骤1)首先将水稻秸秆粉碎至1-5cm,然后进行蒸汽爆破预处理;

步骤2)将经过蒸汽爆破处理的水稻秸秆过50目筛,收集筛下物,然后与酒糟按照3:1的质量比混合得到混合物,再添加到占混合物2-3倍重量的水中,加热至60-70℃,保温条件下

100rpm搅拌60-90min,然后加热至121℃,保温3-5min,自然冷却至室温,得到培养液;

步骤3)将枯草芽孢杆菌种子液按照5-7%的接种量接入含有培养液的光合培养发酵罐中进行培养,培养时间为24-36h,然后接种荚膜红假单胞菌种子液和粘红酵母菌种子液,接种量均为8-10%;继续培养24-36h,制得复合微生物培养物。

5.根据权利要求4所述的复合微生物培养物,其特征在于,所述蒸汽爆破预处理的条件为:压力1.5-1.8MPa、停留时间5-10min。

6.根据权利要求4所述的复合微生物培养物,其特征在于,所述培养条件为:温度为30℃,溶氧浓度为1-3mg/L,光照强度为2000-3000lux。

7.根据权利要求4所述的复合微生物培养物,其特征在于,所述枯草芽孢杆菌种子液的制备方法为:将枯草芽孢杆菌接种到LB固体培养基上培养,得到单菌落;挑取单菌落接种到LB液体培养基上进行培养,得到枯草芽孢杆菌种子液。

8.根据权利要求4所述的复合微生物培养物,其特征在于,所述荚膜红假单胞菌种子液的制备方法为:荚膜红假单胞菌划线接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基培养,然后挑取菌落,接种到液体种子培养基中进行种子培养,得到荚膜红假单胞菌种子液。

9.根据权利要求8所述的复合微生物培养物,其特征在于,所述液体种子培养基组分为:葡萄糖3g/L、酵母膏2g/L、氯化铵0.5g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、七水硫酸镁0.1g/L、七水硫酸亚铁0.01g/L。

10.根据权利要求4所述的复合微生物培养物,其特征在于,所述粘红酵母菌种子液的制备方法为:将粘红酵母菌接种到YPDA固体培养基上培养,得到单菌落;挑取单菌落接种到YPD液体培养基上培养,30℃培养24h,得到粘红酵母菌种子液。