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专利号: 2018105779354
申请人: 河南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种人食管癌EC9706细胞多药耐药细胞株的建立方法,其特征在于:以人食管癌EC9706细胞系为亲本细胞,采用紫杉醇模拟体内化疗过程,逐步提高药物浓度、间歇性反复冲击筛选出耐紫杉醇细胞株,用MTT法测定该细胞株对紫杉醇、阿霉素、长春新碱、顺铂及5-FU食管癌常用化疗药物的耐药指数,选出耐敏感药物5-FU、顺铂的细胞株,通过模拟体内化疗进一步诱导建立人食管癌多药耐药细胞系EC9706/PDFC。

2.如权利要求1所述的人食管癌EC9706细胞多药耐药细胞株的建立方法,其特征在于,所述采用紫杉醇模拟体内化疗过程,逐步提高药物浓度、间歇性反复冲击筛选出耐紫杉醇细胞株的具体步骤为:(1) 将人食管癌EC9706细胞加入含有10%血清的1640培养液进行培养,用0.25%的胰蛋白酶消化传代,当细胞生长至密度达到80%时,更换新鲜的培养液,并在细胞培养液中加入紫杉醇,使得紫杉醇的作用浓度为2.5µg/ml,继续培养24小时后,弃去含紫杉醇的细胞培养液,得初级耐紫杉醇人食管癌EC9706细胞;

(2) 将步骤(1)得到的初级耐药人食管癌EC9706细胞重复步骤(1)的培养3次,得紫杉醇的作用浓度为2.5µg/ml时的中级耐紫杉醇人食管癌EC9706细胞;

(3) 将步骤(1)中紫杉醇的作用浓度逐步增至5µg/ml、7.5µg/ml、10µg/ml,然后将步骤(2)得到的中级耐药人食管癌EC9706细胞,重复不同紫杉醇浓度条件下的步骤(1)的培养步骤,分别重复3次,得到在紫杉醇作用浓度为5µg/ml、7.5µg/ml、10µg/ml条件下的耐紫杉醇细胞株。

3.如权利要求1所述的人食管癌EC9706细胞多药耐药细胞株的建立方法,其特征在于,所述选出耐敏感药物5-FU的细胞株的步骤为:(1)将耐紫杉醇细胞株置于新鲜培养液中,逐步加入紫杉醇和5-FU,至紫杉醇和5-FU的终浓度均为5µg/ml,继续培养24小时,得初级耐5-FU细胞株;

(2)将步骤(1)中5-FU作用浓度逐步增至10µg/ml、15µg/ml、20µg/ml和25µg/ml,再把初级耐5-FU细胞株按照步骤(1)的操作在不同浓度下,分别重复3次,得到能在5-FU作用浓度为10µg/ml、15µg/ml、20µg/ml和25µg/ml条件下存活的耐紫杉醇和5-FU细胞株。

4.如权利要求3所述的人食管癌EC9706细胞多药耐药细胞株的建立方法,其特征在于,所述选出耐敏感药物顺铂的细胞株的步骤为:(1)将耐紫杉醇和5-FU细胞株置于新鲜培养基培养,持续加入紫杉醇和5-FU,使紫杉醇终浓度为5µg/ml、5-FU终浓度为15µg/ml,然后再加入顺铂使其终浓度为1µg/ml,继续培养

24小时,弃去培养液,换新鲜培养液继续培养,得初级耐敏感药物顺铂的细胞株;

(2)将步骤(1)中顺铂的作用浓度增至2µg/ml、3µg/ml及4µg/ml,然后把初级耐敏感药物顺铂的细胞株按照步骤(1)的操作在不同浓度下,分别重复3次,得能在顺铂作用浓度为2µg/ml、3µg/ml和4µg/ml条件下存活的耐顺铂细胞株。

5.如权利要求1-4任一项所述的人食管癌EC9706细胞多药耐药细胞株的建立方法在筛选抗肿瘤药物中的应用。

6.如权利要求1-4任一项所述的人食管癌EC9706细胞多药耐药细胞株的建立方法在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.如权利要求1-4任一项所述的人食管癌EC9706细胞多药耐药细胞株的建立方法在研究耐药肿瘤的细胞内信号激活机制,筛选具有可靠性的耐药逆转剂及耐药肿瘤细胞的治疗靶点中的应用。