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专利号: 2018104371032
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2026-03-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.黑曲霉(Aspergilus niger),于2018年04月28日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山,保藏编号为CCTCC NO:M 2018240。

2.α-L-鼠李糖苷酶质粒,其特征在于:所述α-L-鼠李糖苷酶来源于黑曲霉,其中,所述黑曲霉(Aspergilus niger)于2018年04月28日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山,保藏编号为CCTCC NO:M 2018240;

所述α-L-鼠李糖苷酶核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示。

3.α-L-鼠李糖苷酶重组菌,其特征在于:所述α-L-鼠李糖苷酶来源于黑曲霉,其中,所述黑曲霉(Aspergilus niger)于2018年04月28日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山,保藏编号为CCTCC NO:M 2018240;

所述α-L-鼠李糖苷酶核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示;

所述重组菌包括毕赤酵母。

4.如权利要求3所述的α-L-鼠李糖苷酶重组菌,其特征在于:所述α-L-鼠李糖苷酶重组菌中含有权利要求2所述的α-L-鼠李糖苷酶质粒,所述毕赤酵母包括毕赤酵母GS115。

5.α-L-鼠李糖苷酶的制备方法,其特征在于:包括,

构建重组菌:构建权利要求3~4中任一所述的重组菌;

发酵:重组菌发酵产α-L-鼠李糖苷酶。

6.如权利要求5所述的α-L-鼠李糖苷酶的制备方法,其特征在于:所述构建重组菌,包括,以黑曲霉的mRNA反转录得到的cDNA,以cDNA为模板进行PCR扩增,得到α-L-鼠李糖苷酶基因rha,纯化PCR扩增产物,并与载体pMD19-T连接,然后将连接产物转入大肠杆菌JM109感受态细胞,涂布于氨苄青霉素抗性平板,获得阳性克隆,提取质粒获得重组质粒pMD19-T-rha,其中,所述黑曲霉(Aspergilus niger)于2018年04月28日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山,保藏编号为CCTCC NO:M 2018240;

以重组质粒pMD19-T-rha为模板进行PCR扩增,将回收的扩增产物与经EcoR I、Avr II酶双酶切后的质粒pPIC9K进行同源重组,将得到的质粒导入大肠杆菌 JM109感受态细胞,菌落PCR挑取阳性克隆,获得表达载体pPIC9K-rha。