1.黑曲霉CCTCC NO:M 2018240(Aspergilus niger,WDQ-1),于2018年04月28日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山,保藏编号为CCTCC NO:M 2018240。
2.α-L-鼠李糖苷酶质粒,其特征在于:所述α-L-鼠李糖苷酶来源于所述黑曲霉CCTCC NO:M 2018240,所述α-L-鼠李糖苷酶核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.如权利要求2所述的α-L-鼠李糖苷酶质粒,其特征在于:所述α-L-鼠李糖苷酶质粒,其载体包括pPIC9K。
4.α-L-鼠李糖苷酶重组菌,其特征在于:所述α-L-鼠李糖苷酶来源于所述黑曲霉CCTCC NO:M 2018240,所述重组菌包括毕赤酵母。
5.如权利要求4所述的α-L-鼠李糖苷酶重组菌,其特征在于:所述α-L-鼠李糖苷酶重组菌中含有权利要求2或3所述的α-L-鼠李糖苷酶质粒,所述毕赤酵母包括毕赤酵母GS115。
6.如权利要求5所述的α-L-鼠李糖苷酶重组菌,其特征在于:所述重组菌含有α-L-鼠李糖苷酶与透明颤菌血红蛋白共表达的重组质粒。
7.α-L-鼠李糖苷酶的制备方法,其特征在于:包括,
构建重组菌:构建权利要求4~6任一所述的重组菌;
发酵:重组菌发酵产α-L-鼠李糖苷酶。
8.如权利要求7所述的α-L-鼠李糖苷酶的制备方法,其特征在于:所述构建重组菌,包括,以黑曲霉CCTCC NO:M 2018240的mRNA反转录得到的cDNA,以cDNA为模板进行PCR扩增,得到α-L-鼠李糖苷酶基因rha,纯化PCR扩增产物,并与载体pMD19-T连接,然后将连接产物转入大肠杆菌JM109感受态细胞,涂布于氨苄青霉素抗性平板,获得阳性克隆,提取质粒获得重组质粒pMD19-T-rha;以重组质粒pMD19-T-rha为模板进行PCR扩增,将回收的扩增产物与经EcoR I、Avr II酶双酶切后的质粒pPIC9K进行同源重组,将得到的质粒导入大肠杆菌JM109感受态细胞,菌落PCR挑取阳性克隆,获得表达载体pPIC9K-rha。
9.如权利要求8所述的α-L-鼠李糖苷酶的制备方法,其特征在于:所述构建重组菌还包括,将所述表达载体pPIC9K-rha,用Sal I酶线性化,并导入毕赤酵母GS115感受态细胞,筛选高拷贝重组菌株GS115/pPIC9K-rha-14;构建表达载体pPICZα A-vgb,并线性化后导入毕赤酵母GS115/pPIC9K-rha-14感受态细胞,筛选重组菌株。
10.如权利要求7~9任一所述的α-L-鼠李糖苷酶的制备方法,其特征在于:所述发酵,其种子培养基为YPD,培养温度28~33℃,时间18~30h,发酵接种量为5~10%,发酵培养基为BSM,采用分批发酵阶段,当发酵液中甘油耗尽时,流加补料生长培养基,在OD600达到100~150以上停止流,饥饿培养0.5~2h,然后再流加甲醇诱导,诱导温度为25~28℃,DO保持在20~30%。