1.一种双光子荧光钠离子探针PNa,其特征在于:所述双光子荧光钠离子探针具有以下分子结构:。
2.一种如权利要求1所述的双光子荧光钠离子探针PNa的合成方法,其特征在于:合成路线如下所示:。
3.根据权利要求2所述的合成方法,其特征在于:双光子荧光钠离子探针PNa的合成步骤如下:(1)称取4’-甲酞基苯并-15-冠-5和氢化钠,置于干燥单口烧瓶中,待用;
(2)称取中间体5即1,4-二氰基-2-甲基-5-(二乙基磷酰基甲基)苯溶于四氢呋喃,置于恒压加料器中,将恒压加料器装在单口烧瓶上,并抽真空用氩气保护;
(3)将烧瓶置于冰水浴中,在搅拌和避光的条件下,将含有中间体5的四氢呋喃溶液逐滴滴加到混合液中,滴加时间40~50min;滴加完毕后,室温搅拌反应24h;
(4)反应结束后,真空脱除THF,用二氯甲烷萃提3~4次,每次15~20mL,水洗2~3次,每次10~15mL,加无水氯化钙干燥,过滤,真空脱除溶剂;得粗品经硅胶柱色谱洗脱分离,即得黄色粉末PNa。
4.根据权利要求3所述的合成方法,其特征在于:所述步骤(1)中4’-甲酞基苯并-15-冠-5与氢化钠的摩尔比为1:1.2~1.5;所述步骤(2)中,中间体5和四氢呋喃的摩尔体积比为1:9~12。
5.根据权利要求3所述的合成方法,其特征在于:所述步骤(3)中,搅拌的频率为300r/min。
6.根据权利要求3所述的合成方法,其特征在于:所述步骤(4)中,洗脱液组成为:V(正己烷):V(乙酸乙酯)=12~15:1。
7.根据权利要求1所述的双光子荧光钠离子探针PNa或如权利要求2-7所述的合成方法得到的探针PNa应用于探测细胞内钠离子的存在、细胞内钠离子区域分布和浓度信息。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于:所述的细胞为成纤维细胞。
9.根据权利要求7所述的应用,其特征在于:所述的双光子荧光钠离子探针,其应用方法是:将PNa溶于混合溶液MIS溶液中,采用HEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)缓冲溶液调节pH,在小鼠成纤维细胞培养基中加入1μmol·L-1荧光探针分子PNa,并在30~40℃、含2~10%CO2的细胞培养箱中孵育0.5~1h,取出细胞并用缓冲溶液PBS冲洗3-4次,并于无色血清游离介质中再孵化15~20min,然后用共聚焦激光扫描显微镜(λex=800nm,~1.5W)将射入的激光共聚焦于细胞上,收集600~650nm通道的荧光,由此获得细胞内钠离子浓度信息,实现对细胞内钠离子的检测和变化情况监测。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于:所述MIS溶液是由以下体积比的成分组成:生理盐水:乙醇:DMSO:聚氧乙烯=20:35:30:15。