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专利号: 2018103266274
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测阴沟肠杆菌或检测阴沟肠杆菌导致的桑枯萎病的引物组,其特征在于,该引物组能特异性的扩增如SEQ ID NO.1所示的序列;所述引物组为引物组Yt4,由引物Yt4‑FIP、Yt4‑BIP、Yt4‑F3、Yt4‑B3组成,其中Yt4‑F3、Yt4‑B3、Yt4‑FIP、Yt4‑BIP核苷酸序列依次如SEQ ID NO.2~5所示。

2.权利要求1所述引物组Yt4在非诊断目的检测阴沟肠杆菌方面的应用。

3.权利要求1所述引物组Yt4在检测阴沟肠杆菌导致的桑枯萎病方面的应用或在制备阴沟肠杆菌或阴沟肠杆菌导致的桑枯萎病的检测产品方面的应用。

4.一种检测阴沟肠杆菌导致的桑枯萎病或者非诊断目的的检测阴沟肠杆菌的方法,其特征在于,以待测样品DNA为模板,利用权利要求1所述引物组Yt4进行恒温扩增反应,根据反应结果判断待测样品中是否含有阴沟肠杆菌。

5.根据权利要求4所述方法,其特征在于,所述恒温扩增反应为荧光恒温扩增反应。

6.根据权利要求5所述方法,其特征在于,反应结果的判断方法为:荧光扩增出现S型曲线则待测样品中含有阴沟肠杆菌。

7.根据权利要求4或5所述方法,其特征在于,所述扩增反应的条件为62~64℃反应55~65 min;扩增反应体系为:2×反应缓冲液 12.5µL,40µmol/L外引物Yt4‑F3 0.5µL,10µmol/L外引物Yt4‑B3 0.5µL,40µmol/L内引物Yt4‑FIP 1µL,40µmol/L内引物Yt4‑ BIP 1µL,

8U/µL Bst DNA聚合酶1µL,样品DNA 2µL,ddH2O补足至 25 µL。

8.一种检测阴沟肠杆菌或阴沟肠杆菌导致的桑枯萎病的试剂盒,其特征在于,含有权利要求1所述引物组Yt4。

9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,还含有2×反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、阳性质粒、密封液、无菌水和显示液。