1.一种鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒含有IBV非结构蛋白5b包被的ELISA反应板;还包括:
酶标试剂;
封闭液;
制备所述ELISA反应板所用的包被液是pH为9.6的0.05M 碳酸盐缓冲液;
所述的酶标试剂为辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG抗体;
所述封闭液为含5%脱脂奶粉的PBS;
所述的IBV非结构蛋白5b的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示;所述的IBV非结构蛋白5b的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。
2.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述的IBV非结构蛋白5b是通过重组表达产生的。
3.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,IBV非结构蛋白5b重组表达的方法如下:S1.RT‑PCR扩增IBV 5b基因;
S2.将步骤S1所得基因整合到质粒载体中,获得重组质粒;
S3.将步骤S2所构建的重组质粒转化到宿主菌中并诱导表达,获得菌液;
S4.筛选携带IBV 5b基因的重组菌,在IPTG诱导下大量表达与HIS融合的5b重组蛋白;
S5.利用HIS标签镍柱亲和层析柱纯化,获得提纯后的IBV 5b重组蛋白。
4.根据权利要求3所述试剂盒,其特征在于,步骤S1中,扩增IBV 5b基因的引物对如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示;
步骤S2中,所述的质粒载体为pET‑32a;
步骤S3中,所述的宿主菌为大肠杆菌。
5.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,还包括:洗涤液;
稀释液;
阳性对照样品;
阴性对照样品;
显色液;
终止液。
6.根据权利要求5所述试剂盒,其特征在于, 所述的洗涤液为含0 .05%Tween‑20的PBS;
所述的稀释液为含5%脱脂奶粉的PBST;
所述的阳性对照样品为抗IBV 5b鸡血清;
所述的阴性对照样品为阴性SPF鸡血清;
所述的显色液为TMB 单组分显色液;
所述的终止液为2 M H2SO4。