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专利号: 2018102650002
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒含有IBV非结构蛋白5b包被的ELISA反应板;还包括:

酶标试剂;

封闭液;

制备所述ELISA反应板所用的包被液是pH为9.6的0.05M 碳酸盐缓冲液;

所述的酶标试剂为辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG抗体;

所述封闭液为含5%脱脂奶粉的PBS;

所述的IBV非结构蛋白5b的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示;所述的IBV非结构蛋白5b的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

2.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述的IBV非结构蛋白5b是通过重组表达产生的。

3.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,IBV非结构蛋白5b重组表达的方法如下:S1.RT‑PCR扩增IBV 5b基因;

S2.将步骤S1所得基因整合到质粒载体中,获得重组质粒;

S3.将步骤S2所构建的重组质粒转化到宿主菌中并诱导表达,获得菌液;

S4.筛选携带IBV 5b基因的重组菌,在IPTG诱导下大量表达与HIS融合的5b重组蛋白;

S5.利用HIS标签镍柱亲和层析柱纯化,获得提纯后的IBV 5b重组蛋白。

4.根据权利要求3所述试剂盒,其特征在于,步骤S1中,扩增IBV 5b基因的引物对如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示;

步骤S2中,所述的质粒载体为pET‑32a;

步骤S3中,所述的宿主菌为大肠杆菌。

5.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,还包括:洗涤液;

稀释液;

阳性对照样品;

阴性对照样品;

显色液;

终止液。

6.根据权利要求5所述试剂盒,其特征在于, 所述的洗涤液为含0 .05%Tween‑20的PBS;

所述的稀释液为含5%脱脂奶粉的PBST;

所述的阳性对照样品为抗IBV 5b鸡血清;

所述的阴性对照样品为阴性SPF鸡血清;

所述的显色液为TMB 单组分显色液;

所述的终止液为2 M H2SO4。