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专利号: 2018100771318
申请人: 长江大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 农业;林业;畜牧业;狩猎;诱捕;捕鱼
更新日期:2024-02-28
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法,其特征在于,具体包括如下步骤:

步骤1、外植体的选择:取剑叶龙血树无菌试管苗作为外植体;

步骤2、培养基诱导获得愈伤组织:将外植体置于诱导培养基中诱导得到愈伤组织;

步骤3、愈伤组织增殖培养:将步骤(2)中得到的愈伤组织置于MS继代培养基中进行增殖培养获得大量愈伤组织;

步骤4、愈伤组织分化培养:将步骤(3)中得到的愈伤组织置于MS分化培养基中进行分化培养获得大量丛芽,其中MS分化培养基中添加1-3mg/L的甲硫达嗪TDZ、0.1-0.5mg/L的激动素KT、0.1-0.5mg/L芸苔素内脂、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;

步骤5、生根培养:将步骤(4)中得到的丛芽分成单芽置于1/2MS生根培养基中培养得到完整带根苗,其中1/2MS生根培养基中添加0.5-1.0mg/L的萘乙酸NAA、2g/L的活性炭、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;

步骤6、炼苗移栽:将所述完整带根苗炼苗后,洗净根部培养基立即移栽到灭过菌的栽培基质中。

2.如权利要求1所述的剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法,其特征在于,所述步骤1中取剑叶龙血树无菌试管菌作为外植体的具体做法是先进行饱满种子或种子播种于河沙里萌发的芽的消毒,用洗洁精水溶液清洗外植体表面污垢,置于烧杯中进行流水冲洗5~8min,然后移至超净工作台上,用75%v/v酒精将种子和芽浸泡30s,无菌水冲洗1遍,再用0.1%v/v HgC12浸泡,无菌水浸泡3次,用无菌滤纸吸干外植体表面水分后进行接种MS诱导培养基中,长出剑叶龙血树无菌试管苗。

3.如权利要求1所述的剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法,其特征在于,所述步骤2中,其中所述诱导培养基为在MS培养基中添加了1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、1.0mg/L的二氯苯氧乙酸2.4-D、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,培养条件为:培养温度为23-27℃,暗培养的条件下培养40天。

4.如权利要求1所述的剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法,其特征在于,所述步骤3中,其中MS继代培养基中含1.0mg/L的甲硫达嗪TDZ、0.5mg/L的二氯苯氧乙酸2.4-D、1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂,培养基的pH值为

5.8,培养条件为:在培养温度23-27℃、光照强度1500lux,光照时间为8-10小时/天的条件下培养40天。

5.如权利要求1所述的剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法,其特征在于,所述步骤4中,培养条件为:培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天。

6.如权利要求1所述的剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法,其特征在于,所述步骤5中,培养条件为:培养温度23-27℃、光照强度1500lux,光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天。

7.如权利要求1所述的剑叶龙血树愈伤组织成苗的方法,其特征在于,所述步骤6中,将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖,瓶内加30ml自来水,炼苗4-7天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基立即移栽到灭过菌的栽培基质中。