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专利号: 2018100181698
申请人: 皖西学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)选取蓝色犁头霉菌,菌种活化后,制成种子液转接到液体马铃薯培养基中扩大培养;培养期间,于发酵液中加入山奈酚;所述蓝色犁头霉菌的拉丁名称为:Absidia coerulea,于中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏,菌株保藏编号为:CICC 40302;

(2)加入山奈酚后的第2‑4天向发酵液中添加8‑12%葡萄糖或13‑17%蔗糖作为转化促进剂以转化发酵液,再继续震荡培养;

(3)加入山奈酚后的第5‑8天,取出发酵液并提取分离紫云英苷,得转化总提物;

(4)将上述步骤获得的转化总提物通过硅胶柱层析分离、葡聚糖凝胶纯化,最终获得目标产物‑紫云英苷。

2.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法,其特征在于,所述步骤(1)中菌种的活化方法为:将蓝色犁头霉菌菌株接种于固体马铃薯培养基平板上,置于恒温箱中,23‑26℃培养1‑2d,得活化的蓝色犁头霉菌菌株。

3.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法,其特征在于,所述步骤(1)中蓝色犁头霉菌种子液的制备方法为:将活化后的蓝色犁头霉菌菌株在无菌条8

件下以接种环挑取菌丝接种于液体马铃薯培养基中培养,计数,以浓度为(2‑4)×10 CFU/mL的菌液作为种子液。

4.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法,其特征在于,所述步骤(1)中种子液转接到液体马铃薯培养基中扩大培养的具体方法为:取种子液接种至

30‑60倍体积的液体马铃薯培养基中,24‑26℃恒温震荡培养22‑26h,再将山奈酚溶于丙酮成饱和溶液,按丙酮含量3‑5%加入发酵液。

5.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法,其特征在于,所述步骤(3)中发酵液中紫云英苷的具体提取分离方法为:加入山奈酚后的第5‑8天,取出发酵液,18‑22kHz超声处理8‑12min后,以等体积乙酸乙酯萃取2‑4次,合并萃取液,于48‑52℃减压浓缩,获得转化总提物。

6.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法,其特征在于,所述步骤(4)中硅胶柱层析分离的具体方法为:a.15‑30倍转化总提物质量的柱层层析硅胶作为分离硅胶,干法装柱;

b.将转化总提物溶于甲醇,加入1‑3倍总提物质量的柱层层析硅胶作为拌样硅胶,搅拌均匀后挥干溶剂,干法上样;

c.乙酸乙酯‑甲醇系统梯度洗脱,收集10:1洗脱部位。

7.根据权利要求6所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法,其特征在于,所述柱层层析硅胶为200‑300目硅胶,在使用前先于100‑110℃烘箱中活化1‑3h。

8.根据权利要求1所述的利用微生物转化山奈酚生产紫云英苷的方法,其特征在于,所述步骤(4)中葡聚糖凝胶纯化的具体方法为:所获样品溶于甲醇,葡聚糖凝胶柱氯仿‑甲醇=1:1为洗脱剂纯化。