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专利号: 2017111821015
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,包括以下步骤:

浓缩液制备:取培养后的小球藻藻液1L,离心10-15分钟,去掉所得上清液,留沉淀;将沉淀用缓冲液重悬浮,重复离心3-4次;将离心出的所有藻液进行合并,并用缓冲液稀释,终体积为200-220mL,于0-4℃温度下储存备用;

发酵:按照3.5-5.0%接种经培养后的小球藻,发酵72-96小时得发酵液;

酶液制备:将发酵液在0-4℃、3500-5000r/min条件下离心10-15分钟,将沉淀用缓冲液重悬浮后重复离心2-3次,合并沉淀;将沉淀溶于缓冲后用超声破碎仪破碎细胞,离心后留上清液,沉淀部分用缓冲液进行重悬浮,重复离心3-5次合并上清液,低温浓缩至200-220mL后于0-4℃保存备用;

配制:于3-4℃条件下,将小球藻浓缩液与小球藻酶液按1:0.5-3.0的体积混合,混合液密封后,置于装有冰水的三角瓶中,在20-22℃、200-220r/min条件下振荡混合10-13分钟,以5-6:1的体积添加稳定剂,即得生物表面活性剂。

2.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,其特征在于:所述浓缩液制备步骤中的离心温度为0-4℃,转速为3500-5000r/min。

3.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,其特征在于:所述浓缩液制备步骤中的缓冲液为pH为7.8-7.9的Tris-HCl缓冲溶液。

4. 根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,其特征在于:所述发酵步骤中的发酵培养基组成及其含量为:葡萄糖38-40g/L、玉米浆粉6-8g/L、蛋白胨4-

5g/L、NaCl 12.5-15.0g/L、(NH4)2SO4 1.65-1.70g/L、MgSO4·7H2O 2.2-2.5g/L、KCl 0.5-

0.6g/L、KH2PO4 0.5-0.6g/L、CaCl2 0.1-0.12g/L,121-122℃条件下进行高压蒸汽灭菌15-

30分钟。

5.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,其特征在于:所述发酵步骤中的发酵温度为30-33℃、pH为6.9-7.2、搅拌速度为320-340r/min、通气量0.65-

0.85vvm。

6.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,其特征在于:所述酶液制备步骤中的超声破碎仪功率为1.0-1.3kW,探头振幅为38-45%,温度为2-4℃,时间为

30-48分钟。

7.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,其特征在于:所述酶液制备步骤中的离心温度为0-4℃,转速为11500-12000r/min,离心时间为15-20分钟。

8.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取生物表面活性剂的方法,其特征在于:所述配置步骤中的稳定剂为18-23%甘油、1.0-1.5mMEDTA与0.1-0.13mMDTT,其pH为7.5-7.7。