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专利号: 2017111419525
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种酶催化正丁基-β-D-葡萄糖苷转糖苷制备红景天苷的方法,其特征在于采用β-葡萄糖苷酶催化剂催化β-D-葡萄糖和正丁醇进行反应,在反应48小时后收集反应液,将反应混合物置于沸水浴中10min,减压抽滤去除沉淀。然后将滤液在80℃、0.01Mpa下蒸馏去除正丁醇和水后得到正丁基-β-D-葡萄糖苷。将正丁基-β-D-葡萄糖苷溶解于叔丁醇中配置成重量百分比为6~10%的正丁基-β-D-葡萄糖苷溶液,然后加入含酪醇的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液和β-葡萄糖苷酶催化剂,于恒温振荡器上振荡反应8~16小时。反应结束后,在反应混合物加入10倍体积的甲醇摇匀,用0.45μm膜过滤获得红景天苷,经C18柱高效液相法检测后可知红景天苷产率达到17~35%。

2.根据专利要求1所述的一种酶催化正丁基-β-D-葡萄糖苷转糖苷制备红景天苷的方法,其特征在于β-葡萄糖苷酶为杏仁β-葡萄糖苷酶、农杆菌(Agrobacterium)β-葡萄糖苷酶、白腐真菌(Phanerochaete chrysosporium)β-葡萄糖苷酶、海栖热袍菌(Thermotoga maritima)β-葡萄糖苷酶中的任一种。

3.根据专利要求1所述的一种酶催化正丁基-β-D-葡萄糖苷转糖苷制备红景天苷的方法,其特征在于,β-葡萄糖苷酶催化剂采用如下方法制备:将β-葡萄糖苷酶用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配置成蛋白质的质量百分比为5~20%的缓冲溶液。在缓冲溶液中加入质量百分比浓度为0.5~2.5%的环氧氯丙烷后振荡反应0.5~2小时,缓冲溶液中蛋白质与环氧氯丙烷的质量比为1:0.5~3。反应结束后将反应液在3000~5000rpm条件下离心5~10分钟,收集沉淀冷冻干燥,即为β-葡萄糖苷酶催化剂。

4.根据专利要求1所述的一种酶催化正丁基-β-D-葡萄糖苷转糖苷制备红景天苷的方法,其特征在于,C18柱高效液相法检测方法如下:在配有反相C18色谱柱(汉邦Megres C18

250mm×4.6mm,5μm)的1525型液相色谱仪(美国Waters公司)上检测产品中红景天苷含量。

分析柱的温度为36℃,流动相为甲醇水溶液(甲醇:水=3:7),流动相流速为0.8mL/min。检测器为2996型紫外检测器,波长230nm,进样量为20μL。