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专利号: 2017108741975
申请人: 河南科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种快速检测草甘膦残留的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括检测板、草甘膦抗体溶液、草甘膦二抗溶液、草甘膦标准溶液、洗涤液、稀释液、显色液和终止液;

检测板上固定有草甘膦与载体蛋白的偶联物。

2.根据权利要求1所述的快速检测草甘膦残留的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:检测板,固定有草甘膦与载体蛋白的偶联物;

草甘膦抗体溶液,为草甘膦兔源特异性抗体;

草甘膦二抗溶液,为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体;

草甘膦标准溶液;

洗涤液,为PBST溶液;

稀释液,含5%w/v脱脂奶的PBST溶液;

显色液,为3,3',5,5'-四甲基联苯胺缓冲液;

终止液,为2mol/L的盐酸溶液或硫酸溶液。

3.根据权利要求1所述的快速检测草甘膦残留的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:检测板,固定有草甘膦与载体蛋白的偶联物;

草甘膦抗体溶液,为草甘膦兔源特异性抗体;

草甘膦二抗溶液,为碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG抗体;

草甘膦标准溶液;

洗涤液,为PBST溶液;

稀释液,含5%w/v脱脂奶的PBST溶液;

显色液,为对硝基苯磷酸酯缓冲液;

终止液,为2mol/L的氢氧化钠溶液。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的快速检测草甘膦残留的试剂盒,其特征在于,所述载体蛋白为鸡卵清蛋白;

优选的,所述草甘膦标准溶液的浓度分别为2000ng/mL,1000ng/mL,500ng/mL,250ng/mL,125ng/mL,62.5ng/mL和0ng/mL。

5.根据权利要求1-3任意一项所述的快速检测草甘膦残留的试剂盒,其特征在于,所述偶联物的制备方法包括如下步骤:(a)将2~10mg草甘膦溶解于500~2500μL磷酸盐缓冲液中,得到溶液A;

(b)将2~10mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶解于500~2500μL磷酸盐缓冲液后,然后在搅拌的条件下,将其加入到溶液A中反应8~12min,得到溶液B;

(c)将3~15mg载体蛋白溶解于1000~5000μL磷酸盐缓冲液,然后在搅拌的条件下,将其逐滴缓慢加入到溶液B中,在2~4℃避光条件下搅拌反应2.5~3.5h,然后将反应产物在磷酸盐缓冲液中透析,最后以4500~5500r/min离心4~6min取上清液,即得到偶联物。

6.根据权利要求1-3任意一项所述的快速检测草甘膦残留的试剂盒,其特征在于,所述偶联物经碳酸盐缓冲液稀释后吸附于检测板的检测孔表面。

7.根据权利要求1-3任意一项所述的快速检测草甘膦残留的试剂盒,其特征在于,所述草甘膦抗体溶液的制备方法包括如下步骤:(a)采用牛血清白蛋白作为载体蛋白制备免疫原;

(b)选取清洁级新西兰白兔,采用颈部皮下多点注射进行免疫,免疫剂量为100~300μg/mL/只,共免疫4次,每次间隔2~4周;

(c)免疫程序完成后,进行耳缘静脉或心脏采血,分离血清并采用饱和硫酸铵法提纯抗体,得到草甘膦抗体溶液。

8.根据权利要求1-3任意一项所述的快速检测草甘膦残留的试剂盒,其特征在于,所述检测板为聚苯乙烯材质的96孔板。

9.一种草甘膦残留的检测方法,其特征在于,采用权利要求1-8任意一项所述的快速检测草甘膦残留的试剂盒,包括以下步骤:(a)向检测板上的各检测孔中依次加入不同浓度的草甘膦标准溶液;

(b)从草甘膦标准溶液低浓度检测孔向草甘膦标准溶液高浓度检测孔逐孔加入草甘膦抗体溶液,37℃温育10~20min,洗板;

(c)向检测板上的各检测孔中加入草甘膦二抗溶液,37℃温育25~35min,洗板;

(d)向检测板上的各检测孔中加入显色液,反应5~15min;

(e)向检测板上的各检测孔中加入终止液终止反应,测定OD450nm或OD405nm吸光值,根据草甘膦的竞争酶联免疫标准曲线,计算样品中草甘膦残留浓度。

10.权利要求1-8任意一项所述的快速检测草甘膦残留的试剂盒或权利要求9所述的草甘膦残留的检测方法在检测环境或食品中草甘膦残留的应用。