1.一种制备氨基硅烷化修饰的磁性颗粒的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)Fe3O4磁核的制备:
以七水合硫酸亚铁和六水合氯化铁为底物,加入乙醇溶液,在氮气流保护下,在60℃,搅拌一段时间,加入适量氨水,使得反应溶液的pH值在10.0到11.0的范围内,继续搅拌使反应充分,对所得混合溶液施加外加磁场分离沉淀,并用乙醇和去离子水多次清洗沉淀,真空干燥后即得到Fe3O4磁纳米颗粒;
(2)磁性纳米颗粒的氨基硅烷化修饰:
将Fe3O4颗粒溶于90%乙醇中,在氮气流的保护下加入氨水,在30℃下搅拌一段时间;分别加入正硅酸乙酯(TEOS)和3-(2-氨乙基)氨丙基甲基二甲氧基硅烷(APTMS),在30℃下反应6h,对磁材料进行氨基硅烷化修饰;反应结束后在外加磁场作用下分离沉淀,并用去离子水和乙醇依次清洗沉淀多次,直到溶液的pH值呈中性;将沉淀物真空干燥即可得到Fe3O4@SiO2-NH2材料。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,
步骤(1)Fe3O4磁核的制备:
以七水合硫酸亚铁和六水合氯化铁为底物,二价铁和三价铁的摩尔比为1:3,加入20%乙醇溶液,反应体系中的铁离子总浓度为0.05mol/L,在氮气流保护下,体系温度维持在60℃,搅拌20min,加入适量氨水,使得反应溶液的pH值在10.0到11.0的范围内,继续搅拌
10min使反应充分;对所得混合溶液施加外加磁场分离沉淀,并用乙醇和去离子水多次清洗沉淀,真空干燥后即得到Fe3O4磁纳米颗粒。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,
步骤(2)磁性纳米颗粒的氨基硅烷化修饰:
将Fe3O4颗粒溶于90%乙醇中,在氮气流的保护下加入1mL氨水,在30℃下搅拌20min,分别加入正硅酸乙酯(TEOS)和3-(2-氨乙基)氨丙基甲基二甲氧基硅烷(APTMS),在30℃下反应6h,对磁材料进行氨基硅烷化修饰;反应结束后在外加磁场作用下分离沉淀,并用去离子水和乙醇依次清洗沉淀多次,直到溶液的pH值呈中性,将沉淀物真空干燥即可得到Fe3O4@SiO2-NH2材料。
4.一种应用权利要求1~3任一所述方法制备得到的氨基硅烷化修饰的磁性颗粒。
5.一种应用权利要求4所述氨基硅烷化修饰的磁性颗粒分离纯化蛋白的方法,其特征在于,将Fe3O4@SiO2-NH2磁纳米颗粒与含待分离蛋白的溶液混合,在20-40℃条件下震荡吸附10-120min,达到吸附平衡后,通过施加外加磁场的作用,使得磁性纳米材料-蛋白质复合体与上清液分离;将氨基硅烷化磁性颗粒-蛋白复合体,利用pH5.0-9.0的磷酸盐缓冲液在恒温水浴摇床条件下进行解吸,解吸时间为0.5-2h,解吸结束后,在外加磁场作用下收集含待分离蛋白的上清溶液和Fe3O4@SiO2-NH2磁性颗粒。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述待分离蛋白为牛血清蛋白。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,均匀混合50mgFe3O4@SiO2-NH2磁纳米颗粒与
5mL浓度为0.2-1.6mg/mL,pH分别为6.5-9.0的牛血清白蛋白磷酸盐缓冲溶液,在20-40℃条件下150r/min震荡吸附10-120min,达到吸附平衡后,通过施加外加磁场的作用,使得磁性纳米材料-蛋白质复合体与上清液分离;将氨基硅烷化磁性颗粒-蛋白复合体置于pH5.0-
9.0的磷酸盐缓冲液中,在30℃-60℃条件下进行解吸,解吸时间为0.5-2h,解吸结束后,在外加磁场作用下收集上清溶液和Fe3O4@SiO2-NH2磁性颗粒。
8.权利要求4所述氨基硅烷化修饰的磁性颗粒在分离纯化蛋白中的应用。
9.含有权利要求4所述氨基硅烷化修饰的磁性颗粒的用于分离纯化蛋白的试剂盒。
10.权利要求9所述试剂盒在分离纯化蛋白中的应用。