1.一种测定样品中亚硫酸氢盐的检测方法,其特征在于,
包括,基于荧光探针方法的亚硫酸氢盐检测试剂盒,所述试剂盒包含试剂储备液a和试剂储备液b;所述试剂储备液a是pH值为6~8的磷酸盐缓冲液,所述试剂储备液b为式(I)所示荧光探针的有机溶剂溶液,所述有机溶剂选自二甲基亚砜,N,N-二甲基甲酰胺、乙腈中的至少一种所述试剂储备液a中的磷酸盐选自Na2HPO4、NaH2PO4和KH2PO4中的至少一种;
所述试剂储备液a中的磷酸盐的摩尔浓度为10mM;所述试剂储备液b中式(I)所示荧光探针的浓度为0.01mM~1mM;
其中,式(I)所示荧光探针的制备,包含以下步骤:在碱存在的条件下,式(II)所示的化合物与式(III)所示的化合物反应,得到式(I)所示荧光探针式(I)所示荧光探针的制备中,所述碱选自有机碱或无机碱;其中,所述有机碱选自三乙胺、吡啶中的至少一种;所述无机碱选自碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠、碳酸氢钠中的至少一种;式(II)所示的化合物、式(III)所示的化合物和碱的投料摩尔比为1:1~5:0.5~5;反应温度为30℃~60℃;反应在合适的有机溶剂中进行,所述合适的有机溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、乙腈中的至少一种;
还包括,使用上述亚硫酸氢盐检测试剂盒测定样品中的亚硫酸氢盐的检测方法,其步骤是:(1)制备标准曲线
以630nm~690nm作为激发波长,测定一系列不同浓度的亚硫酸氢盐标准品溶液在发射波长690nm~750nm处的荧光强度记为F,以亚硫酸氢盐的浓度C为横坐标,荧光强度值F为纵坐标绘制标准曲线,其中,所述不同浓度的亚硫酸氢盐标准品溶液是由试剂盒中的试剂储备液a、试剂储备液b和亚硫酸氢盐标准储备溶液配制得到的;
(2)检测样品中亚硫酸氢盐的浓度
将步骤(1)所述亚硫酸氢盐标准品溶液替换为待测样品,向其中加入试剂储备液b,按照步骤(1)所述方法检测待测样品在与步骤(1)相同的发射波长时的荧光强度,记为F’,将所述F’代入步骤(1)所得标准曲线,进而得到待测样品中亚硫酸氢盐的浓度。
2.根据权利要求1所述的一种测定样品中亚硫酸氢盐的检测方法,其特征在于,使用亚硫酸氢盐检测试剂盒测定样品中的亚硫酸氢盐的检测方法,或,其步骤是:
(i)测定空白对照样品的荧光强度或荧光成像
以630nm~690nm作为激发波长,向不含亚硫酸氢盐的对照样品中加入一定浓度的试剂储备液b,一定时间后用试剂储备液a清洗,然后在发射波长为690nm~750nm处用荧光仪测定体系的荧光强度,或者是用激光共聚焦进行荧光成像;
(ii)测定待测样品荧光强度或荧光成像
向待测样品中加入与步骤(i)相同浓度的试剂储备液b,一定时间后用试剂储备液a清洗,测定体系在与步骤(i)相同的发射波长处的荧光强度或者拍摄荧光成像,并与步骤(i)测得的荧光强度或荧光成像对比;
当待测样品的荧光强度小于对照样品的荧光强度或者待测样品荧光成像亮度比对照样品荧光成像弱时,则说明待测样品中含有亚硫酸氢盐。
3.权利要求1或2所述亚硫酸氢盐检测试剂盒和检测方法用于测定样品中亚硫酸氢盐的应用。