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专利号: 2016109918770
申请人: 桂林理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种植物亚细胞中总可溶性酚的分离提取方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤1,取新鲜水稻幼苗样品0.4g-0.6g在3mL-8mL的提取液中冰浴研磨成匀浆;提取液包括:0.25mM蔗糖、50mM Tris-HCl以及1mM二硫苏糖醇;所述提取液pH为7.5;

步骤2,将步骤1得到的匀浆倒入离心管中,在600r/min的条件下,4℃低温离心1min;将上清液a倒入一新的离心管中,沉淀物a在10000r/min的条件下,4℃低温离心10min;得到沉淀物b为细胞壁组分,上清液b留作备用;

步骤3,将上清液a和上清液b混合,得到上清液c,将上清液c在10000r/min的条件下,4℃低温离心30min,得到上清液d和沉淀物d;其中,上清液d为细胞液中的总可溶性酚,沉淀物d为细胞器组分;

步骤4,在沉淀物b和沉淀物d中分别加入5mL80%甲醇,在2000r/min-3000r/min的条件下,旋涡1min-2min,混匀;然后再在10000r/min的条件下,4℃低温离心5min,倒掉上清液分别得到沉淀物e和沉淀物f;

步骤5,在沉淀物e和沉淀物f中分别加入3mL-8mL80%甲醇,在2000r/min-3000r/min的条件下,旋涡1min-2min,混匀;然后在40KHZ的条件下,25℃超声处理25min-40min,再在

100rmp-200rmp的条件下震荡10min-15min,最后在10000r/min的条件下,4℃低温离心

15min,分别得到上清液g和上清液h,所述上清液g为细胞壁中的总可溶性酚,所述上清液h为细胞器中的总可溶性酚。