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专利号: 2016102073326
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种AMOZ半抗原,其特征在于,其具有如式(I)所示的结构:

2.权利要求1所述AMOZ半抗原的制备方法,其特征在于,是将4-巯基苯甲醛和AMOZ分别溶于无水甲醇中,搅拌过程中将AMOZ的甲醇溶液缓慢滴加入4-巯基苯甲醛的甲醇溶液中,室温搅拌过夜,反应结束后过滤,分别用蒸馏水和无水甲醇洗涤,干燥即得。

3.一种AMOZ人工抗原,其特征在于,其具有如式(Ⅱ)所示的结构:

4.权利要求3所述AMOZ人工抗原的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S11.将载体蛋白溶于PBS溶液中,记为A液;

S12.将双功能试剂溶于N,N-二甲基甲酰胺中,记为B液;

S13.在一定温度下磁力搅拌,将B液逐滴加入A液中,反应一段时间后,用透析液透析,得溶液C;

S14.将权利要求1所述半抗原溶于N,N-二甲基甲酰胺中,将此溶液逐滴加入C液中,反应一段时间后,用透析液透析,得到人工抗原;

所述载体蛋白为钥孔血蓝蛋白、牛血清白蛋白质或卵清蛋白;所述透析液为生理盐水或pH 7.4的0.01mol/L的PBS溶液。

5.一种LMG半抗原,其特征在于,其具有如式(Ⅲ)所示的结构:

6.权利要求5所述LMG半抗原的制备方法,其特征在于,是将4-巯基苯甲醛溶于无水甲醇中,向其中加入N,N-二甲基苯胺和催化剂BOP,在氮气保护情况下加热回流,反应过夜,反应结束后,过滤干燥即得。

7.一种LMG人工抗原,其特征在于,其具有如式(Ⅳ)所示的结构:

8.权利要求7所述LMG人工抗原的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S21.将载体蛋白溶于PBS溶液中,记为A液;

S22.将双功能试剂溶于N,N-二甲基甲酰胺中,记为B液;

S23.在一定温度下磁力搅拌,将B液逐滴加入A液中,反应一段时间后,用透析液透析,得溶液C;

S24.将权利要求5所述LMG半抗原溶于N,N-二甲基甲酰胺中,将此溶液逐滴加入C液中,反应一段时间后,用透析液透析,得到人工抗原;

所述载体蛋白为钥孔血蓝蛋白、牛血清白蛋白质或卵清蛋白;所述透析液为生理盐水或pH 7.4的0.01mol/L的PBS溶液。

9.一种同时检测AMOZ、MG及LMG的免疫检测方法,包括以下步骤:S41.分别将AMOZ包被抗原、LMG包被抗原包被在同一酶标板的不同微孔内,孵育、洗板、封闭;

S42.分别将AMOZ的标准液、LMG标准液或待测样品液加入酶标板相应微孔内;所述样品液经还原剂处理;

S43.将抗AMOZ和LMG的双特异性抗体溶液加入酶标板所有微孔内,孵育、洗板;

S44.将酶标二抗溶液加入酶标板所有微孔内,孵育、洗板;

S45.将显色液加入酶标板所有微孔内,孵育;

S46.将终止液加入酶标板所有微孔内,并将酶标板用酶标仪读数;

S47.分别绘制AMOZ和LMG的标准曲线,定量检测AMOZ和LMG;

其中,步骤S42所述还原剂为硼氢化钠、硼氢化钾或硫代硫酸钠溶液;步骤S45所述显色液为步骤S44所述酶标二抗中酶所对应的的底物溶液;S46所述终止液为浓硫酸或氢氧化钠溶液;

步骤S43所述抗AMOZ和LMG的双特异性抗体的制备方法包括以下步骤:S31.设计合成权利要求1所述AMOZ半抗原和权利要求5所述LMG半抗原,并分别将其与载体蛋白偶联,制备权利要求3所述AMOZ人工抗原和权利要求7所述LMG人工抗原;

S32.分别利用权利要求3所述AMOZ人工抗原和权利要求7所述LMG人工抗原制备能分泌抗AMOZ单克隆抗体的杂交瘤细胞株和抗LMG单克隆抗体的杂交瘤细胞株;

S33.采用杂交-杂交瘤技术筛选制备得到抗AMOZ和LMG的双特异性抗体。