1.一种抗凝血黑莓籽有效成分的提取分离方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)以黑莓籽为原料,黑莓籽破碎后,用石油醚浸提,石油醚浸提液合并、挥干石油醚后,加入70 %乙醇浸提,乙醇浸提液合并、过滤、浓缩得乙醇总浸膏,依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,回收溶剂,得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位;
2)乙酸乙酯部位进行200 300目硅胶柱色谱,二氯甲烷-甲醇梯度洗脱,比例为100:0~ ~
1:1,以TLC薄层色谱检测合并,得到6个组分,按照所得组分极性由小到大依次标记为组分
1-6,其中组分5再经反复硅胶H柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱得到化合物1;
3)正丁醇部位加入70 %乙醇溶解后,D-101大孔树脂吸附上样,静置过夜,后依次用水、
20 %乙醇、40 %乙醇、60 %乙醇、80 %乙醇和无水乙醇梯度洗脱,每种洗脱液洗脱5个柱体积,每次2000 mL,回收洗脱液后,得到相应洗脱部分;
80%乙醇洗脱部分经硅胶H柱色谱,得到2个组分,按照所得组分极性由小到大依次标记为组分1-2,组分1经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱,得到化合物2,组分2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱与反复硅胶H柱色谱,得到化合物3;
60 %乙醇洗脱部分先进行200~300目硅胶柱色谱,后经硅胶H柱色谱,TLC薄层色谱检测合并,得到2个组分,按照所得组分极性由小到大依次标记为组分1-2,组分1经反复硅胶H柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱,得到化合物4;组分2经反复Sephadex LH-20凝胶柱色谱、硅胶H柱色谱,所得样品经反相液相制备色谱得到化合物5;
40 %乙醇洗脱部分先进行200~300目硅胶柱色谱,后经反复硅胶H柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱,得到化合物6;
化合物1、2、3、4、5、6即为抗凝血黑莓籽有效成分,化合物1、2、3、4、5、6依次是1α,2α,3β,19α-四羟基-12-烯-28-乌苏酸、委陵菜酸、9(Z)-十八烯酸酰胺、甜叶苷 R1 、坡模酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯、3,5,7,2',5'-五羟基黄烷,其结构分别如下:。