欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13336804447 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13336804447
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2015104884985
申请人: 临沂大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2026-04-02
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种重组人表皮生长因子的纯化方法,其特征在于,包括下述纯化步骤:(1)Ni Sepharose亲和层析:待Ni Sepharose层析柱用平衡缓冲液平衡后,将pH7.5-8.5的含有重组人表皮生长因子的培养液离心上清上样,平衡缓冲液复平衡后,用含

20mmol/L咪唑的平衡缓冲液洗脱目的蛋白;

(2)Source 15RPC反相层析:待Source 15RPC反相层析柱用平衡缓冲液平衡后,将步骤(1)目的蛋白洗脱液上样,平衡缓冲液复平衡后,用洗脱液Ⅰ洗脱杂质蛋白,用洗脱液Ⅱ洗脱目的蛋白;

(3)Source 30Q离子交换层析:待Source 30Q离子交换层析柱用平衡缓冲液平衡后,将步骤(2)目的蛋白洗脱液上样,平衡缓冲液复平衡后,用浓缩缓冲液洗脱,即得目的蛋白原液。

2.如权利要求1所述的重组人表皮生长因子的纯化方法,其特征在于:所述的重组人表皮生长因子为酵母菌分泌表达。

3.如权利要求1所述的重组人表皮生长因子的纯化方法,其特征在于:步骤(1)-(3)中所用的平衡缓冲液为磷酸缓冲液或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液,缓冲浓度为

10-50mmol/L,pH为7.5-8.5。

4.如权利要求3所述的重组人表皮生长因子的纯化方法,其特征在于:步骤(1)-(3)中所用的平衡缓冲液为磷酸缓冲液,缓冲浓度为25mmol/L,pH为8.0。

5.如权利要求1所述的重组人表皮生长因子的纯化方法,其特征在于:步骤(2)中所用的洗脱液Ⅰ为含25-35%乙腈的平衡缓冲液。

6.如权利要求5所述的重组人表皮生长因子的纯化方法,其特征在于:步骤(2)中所用的洗脱液Ⅰ为含33%乙腈的平衡缓冲液。

7.如权利要求1所述的重组人表皮生长因子的纯化方法,其特征在于:步骤(2)中所用的洗脱液Ⅱ为含35-45%乙腈的平衡缓冲液。

8.如权利要求7所述的重组人表皮生长因子的纯化方法,其特征在于:步骤(2)中所用的洗脱液Ⅱ为含40%乙腈的平衡缓冲液。

9.如权利要求1所述的重组人表皮生长因子的纯化方法,其特征在于:步骤(3)中所用的浓缩缓冲液为PB缓冲液或甘氨酸-盐酸缓冲液,缓冲浓度为10-50mmol/L,pH为

3.0-4.0。

10.如权利要求9所述的重组人表皮生长因子的纯化方法,其特征在于:步骤(3)中所用的浓缩缓冲液为PB缓冲液,缓冲浓度为25mmol/L,pH为3.5。