1.利用响应曲面法优化黑果枸杞多糖的复合酶微波提取方法，包括以下步骤：⑴样品制备：

将黑果枸杞果实洗净，在25 30℃温度下烘干48 72h后粉碎至40 80目，按20 40 mL/g~ ~ ~ ~料液比加入体积浓度为80%的乙醇溶液，在25℃ 35℃浸泡2 4h后过滤，得到滤渣，该滤渣于~ ~

40 60℃下干燥12 24h，即得脱除脂类、色素和小分子糖的黑果枸杞果粉；然后在微波反应~ ~器中，按15 25mL/g不同的料液比加入复合酶溶液，40 50℃静置浸泡1.5 2.5h的不同时间，~ ~ ~在300 400W的不同微波功率下按20 30min的不同时间进行反应提取，提取后的溶液分别以~ ~

4000 5000转/min进行离心，15 20min后收集上清液A，该上清液A经50 60℃真空旋转蒸发~ ~ ~浓缩至原体积的1/6 1/8后，得到浓缩产物；所述浓缩产物中加入其体积3 4倍的无水乙醇~ ~溶液混匀，当其溶液中乙醇浓度为80%时，于2 6℃下静置12 24h，再分别以4000 5000转/~ ~ ~min进行离心，15 20min后收集沉淀；沉淀加水复溶后，以4000 5000转/min进行离心，15~ ~ ~

20min后收集上清液B，该上清液B于-70℃ -85℃预冻4 6 h，最后在大气压力为10 100Pa、~ ~ ~温度为-55℃ -70℃的条件下冷冻干燥24 72h，得到对应于不同微波功率的黑果枸杞多糖~ ~提取物干燥粉末；

所述复合酶溶液是指蛋白酶、纤维素酶和果胶酶等质量混合后加去离子水配制而成的pH为4 5的溶液；

~

⑵用苯酚-硫酸法测定每个提取液中多糖含量：

①标准曲线制作：

准确称取10 mg葡萄糖，配制成浓度为0.1 mg/mL的溶液，分别取0 mL、0.1 mL、0.2 mL、

0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL，依次补加蒸馏水至1 mL；

以蒸馏水作对照，分别向其中加入0.5 mL 6%的苯酚，振荡摇匀，垂直快速加入2.5 mL浓H2SO4，振荡摇匀后，静止30 min，冷却至室温，然后在490 nm波长下测吸光值，以糖溶液浓度μg/mL为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线；

②样品中多糖含量的测定：

将样品配置成60 μg/mL的溶液，取样品1 mL，不加蒸馏水，其余操作均与所述步骤①制作标准曲线相同；在490 nm波长下比色，所得数值在标准曲线上查出相应的总糖含量；

⑶实验设计与统计分析：

①单因素试验：

依次改变微波功率、提取时间、浸泡时间、料液比进行单因素试验，用苯酚-硫酸法测定所得的黑果枸杞多糖提取物中多糖的含量，并按下式计算多糖产率，每次处理重复三次：多糖产率（%）=[(多糖含量×提取物重量)/ 果粉重量]×100%；

②响应面法优化设计：

根据单因素试验结果，选取多糖提取效果影响较显著的微波功率、提取时间、浸泡时间、料液比这4个因素，利用Design Expert 8.0软件根据Box-Behnken设计原则进行实验设计，以微波功率X1、提取时间X2、浸泡时间X3和料液比X4为自变量，以多糖的产率为响应值y，建立多元二次回归方程：y=-17.47108+0.12776X1+0.45350X2-1.29400X3-0.14273X4-0.00080X1X2+ 0.00320X1X3+0.00029X1X4-0.00200X2X3+0.00120X2X4+0.018000X3X4-1.60067×10-3X12-2.45667×10-

3X22+4.33333×10-3X32-1.06667×10-3X42；

⑷实验结果分析与优化：

利用Design Expert 8.0软件根据多元二次回归方程进行绘图分析，得到回归方程的响应面及其等高线图。