1.路氏双髻鲨血管生成抑制因子的制备方法，所述路氏双髻鲨血管生成抑制因子的氨基酸序列为Pro-Asp-Tyr-Lys-Phe-Lys，其制备方法包括以下步骤：

1）路氏双髻鲨软骨活性蛋白组分的制备：将破碎匀浆的路氏双髻鲨软骨按固液比1g：8～10mL加入到1.0mol/L盐酸胍溶液中，4℃、振荡抽提32～36h后，于4℃、10000r/min离心15～20min，取上清液装入截留分子量为1kDa的透析袋中，利用pH 7.6的Tris-HCl缓冲液于4℃以下透析22～24h，得路氏双髻鲨软骨蛋白粗提液；路氏双髻鲨软骨蛋白粗提液置于4℃，缓慢加入4℃以下预冷的丙酮至丙酮浓度为30%，静置0.5～1h后，于4℃以下10000r/min离心15～25min，取上清液加入4℃以下预冷的丙酮至丙酮浓度达60%，静置0.5～1h后，4℃以下、10000r/min离心15～25min，取沉淀置于截留分子量为1kDa的透析袋内用双蒸水于4℃以下透析22～24h，透析液冷冻干燥，得路氏双髻鲨软骨活性蛋白组分；

2）路氏双髻鲨软骨活性蛋白组分的酶解：将路氏双髻鲨软骨活性蛋白组分按固液比

1g:20～25mL加入浓度0.05mol/L、pH 9～10的Gly-NaOH缓冲液，得混合液；将混合液温度升至45～55℃预热5～10min，按照路氏双髻鲨软骨活性蛋白组分质量的1.5～2.5%加入酶活力≥2.0×105U/g的碱性蛋白酶，酶解温度为45～55℃，酶解5～6h后，将溶液升温至90～95℃，并于此温度保持10～15min后，10000g离心20～25min，取上清液，即为软骨活性蛋白组分酶解产物；

3）路氏双髻鲨软骨血管生成抑制因子的制备：将制备的软骨活性蛋白组分酶解产物采用1kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1kDa部分，得超滤酶解液，再将酶解液依次经凝胶过滤层析、细胞膜色谱和反相高效液相色谱纯化，得到路氏双髻鲨软骨血管生成抑制因子；

其中，所述步骤3）的凝胶过滤层析、细胞膜色谱和反相高效液相色谱纯化的具体过程为：凝胶过滤层析：将上述超滤酶解液用pH 6.5～7.5磷酸盐缓冲液配成15～25mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶G-15柱层析分离，用pH 6.5～7.5磷酸盐缓冲液进行洗脱，根据215nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制作用最强组分为凝胶层析酶解物；

细胞膜色谱纯化：将上述凝胶层析酶解物用三蒸水配成40～50μg/mL的溶液，加入到细胞膜色谱柱进行纯化，根据215nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，对鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）血管生成抑制作用最强组分为细胞膜色谱纯化酶解物；所述细胞膜色谱柱中采用的细胞膜为人脐静脉血管内皮细胞株ECV304的细胞膜；所述细胞膜色谱条件为：进样量5～10μL；细胞膜色谱柱规格为150mm×4.6mm，5μm；柱温为37℃；流动相：三蒸水；紫外检测波长

215nm；流速：0.2mL/min；

反相高效液相色谱纯化：将上述细胞膜色谱纯化酶解物用三蒸水配成80～100μg/mL的溶液，利用RP-HPLC进行纯化，收集对鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）血管生成抑制作用最强的多肽，经检测为单一峰，利用蛋白/多肽序列分析仪测定氨基酸序列为Pro-Asp-Tyr-Lys-Phe-Lys（PDYKFK），ESI-MS检测分子量为796.90Da；所述RP-HPLC条件为：进样量15～20μL；色谱柱是规格为250mm×4.6mm、5μm的Zorbax C18；流动相为20%乙腈；紫外检测波长为215nm。