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专利号: 2015101588528
申请人: 安徽科技学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种改善血小板聚集的药物组合物,其特征在于该组合物包含以下组分:

丹参内酯、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、三七皂苷P和新蛇床内酯。

2.根据权利要求1所述的改善血小板聚集的组合物,其特征在于该组合物中:

丹参内酯1-3重量份、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷0.6-1.8重量份、三七皂苷P1.5-4.5重量份,新蛇床内酯0.8-2.4重量份。

3.一种以PTAFR为靶点筛选权利要求1或2所述的改善血小板聚集的组合物的方法,其特征在于包含以下步骤:

1)PTAFR蛋白三维结构的获取;

2)采用分子对接软件,以银杏内酯B为中心确定PTAFR蛋白结构的活性位点区域;

3)对三七、红花、丹参、川芎四种中药材的小分子配体与PTAFR蛋白进行计算机虚拟筛选,根据设定的活性区域,利用分子对接软件,将每个小分子配体与PTAFR活性位点区域进行分子对接,记录对接得分数据;

4)根据步骤3)的对接得分结果进行排序,确定具血小板聚集的药物组合物:丹参内酯、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、三七皂苷P和新蛇床内酯。

4.根据权利要求3所述的以PTAFR为靶点筛选改善血小板聚集的组合物的方法,其特征在于在PTAFR蛋白三维结构的获取之前,从数据库搜寻中药三七、红花、丹参、川芎四种中药材的有效化学成分,共得到240个化学成分信息,其中三七42个,红花88个,丹参53个,川芎57个,对每个化合物应用MacroModel小分子配体前处理优化模块进行前处理优化。

5.根据权利要求4所述的以PTAFR为靶点筛选改善血小板聚集的组合物的方法,其特征在于对每个化合物应用MacroModel小分子配体前处理优化模块进行前处理优化,能量-1 -1阈值设定为0.5kJ·nm ·mol 。

6.根据权利要求3所述的以PTAFR为靶点筛选改善血小板聚集的组合物的方法,其特征在于步骤1)中PTAFR蛋白三维结构的获取具体是通过以下方式:通过Swiss-Prot搜寻PTAFR蛋白的一级氨基酸序列,该蛋白共有342个氨基酸残基,以人源P2Y12受体为模板,在Swiss-Prot和NCBI蛋白质序列数据库中检索目标序列基础上,选用Prime模块,应用同源模建方式,在NCBI BLAST序列比对基础上建立PTAFR蛋白三维结构。

7.根据权利要求3所述的以PTAFR为靶点筛选改善血小板聚集的组合物的方法,其特征在于步骤2)所述的以银杏内酯B为中心确定PTAFR蛋白结构的活性位点区域的具体方法是:PTAFR蛋白和银杏内酯B分别加入到分子对接Maestro系统中,进行加氢原子、删除水分子、处理重原子前处理,采用glide对接模块下receptor grid generation面板,以银杏内酯B为中心确定PTAFR蛋白结构的活性位点区域。

8.根据权利要求3所述的以PTAFR为靶点筛选改善血小板聚集的组合物的方法,其特征在于该方法步骤1)中PTAFR蛋白三维结构的获取后,对构建的蛋白进行模型验证和分子动力学方式评价结构合理性。

9.根据权利要求3所述的以PTAFR为靶点筛选改善血小板聚集的组合物的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)从数据库搜寻中药三七、红花、丹参、川芎四种中药材到的有效化学成分,共得到

240个化学成分信息,其中三七42个,红花88个,丹参53个,川芎57个,对每个化合物应用MacroModel小分子配体前处理优化模块进行前处理优化;

(2)通过Swiss-Prot搜寻PTAFR蛋白的一级氨基酸序列,该蛋白共有342个氨基酸残基,以人源P2Y12受体为模板,在Swiss-Prot和NCBI蛋白质序列数据库中检索目标序列基础上,选用Prime模块,应用同源模建方式,在NCBI BLAST序列比对基础上建立PTAFR蛋白三维结构;

(3)将步骤(2)得到的PTAFR蛋白和银杏内酯B分别加入到分子对接Maestro系统中,进行加氢原子、删除水分子、处理重原子前处理,采用glide对接模块下receptor grid generation面板,以银杏内酯B为中心确定PTAFR蛋白结构的活性位点区域;将步骤(1)得到的四味中药的240个化合物分子导入分子对接Maestro系统中,PTAFR蛋白和小分子物质间距离设定为1.0/0.8;将进行三七、红花、丹参、川芎四味中药材的240个化合物小分子分别引入到PTAFR蛋白结构的活性位点区域,与PTAFR蛋白进行虚拟筛选工作,每个化合物与PTAFR活性位点区域进行分子对接,记录对接得分数据;根据对接得分进行排序,确定具血小板聚集的药物组合物:丹参内酯、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、三七皂苷P和新蛇床内酯;

(4)通过实体药理实验进行生物活性验证。

10.根据权利要求9所述的以PTAFR为靶点筛选改善血小板聚集的组合物的方法,其特征在于药理实验步骤为:(1)取体重18-22g的ICR小鼠,分别给予相对应的药物,尾静脉注射给药,连续给药7天,末次给药结束后1.5-2.5小时内摘取小鼠眼球取血,肝素钠抗凝,5000转/分钟离心取上清液得到含药血浆;

(2)选用小鼠血小板活化因子酶联免疫分析试剂盒,应用双抗体夹心法测定标本中小鼠血小板活化因子水平,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度,通过标准曲线计算样品中小鼠血小板活化因子浓度分别对上述的含药血浆进行检测;

(3)将每个测得值与空白对照组的差值除以空白对照组的测得值,即得PTAFR抑制率评价四个化合物组合抑制PTAFR药效特征。