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专利号: 2015100759261
申请人: 河南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种构建肿瘤多药耐药细胞模型的方法,其特征在于,包括以ROS为孵育药物对敏感肿瘤细胞进行持续培养、使敏感肿瘤细胞产生多药耐药的步骤。

2.如权利要求1所述构建肿瘤多药耐药细胞模型的方法,其特征在于,所述ROS为H2O2。

3.如权利要求1所述构建肿瘤多药耐药细胞模型的方法,其特征在于,所述敏感肿瘤细胞为人乳腺癌细胞MCF-7。

4.如权利要求1-3任一所述构建肿瘤多药耐药细胞模型的方法,其特征在于,所述方法的具体步骤是:(1)细胞培养:选择某种对化疗药物敏感的肿瘤细胞株,调整细胞浓度,分组培养备用;

(2)筛选培养条件:各组细胞分别使用不同的ROS浓度进行持续培养,4周后在存活细胞组中选择最高的ROS浓度作为该种耐药模型的最优造模浓度;

(3)构建耐药模型:选用对数生长期的该种肿瘤细胞,调整细胞浓度,使用步骤(2)所得的最优造模浓度持续培养肿瘤细胞,培养过程中按生长情况传代;

(4)耐药性跟踪指导的循环培养:每隔2-3周对步骤(3)中的ROS培养细胞进行耐药倍数评价;重复执行步骤(3)的相关操作,直到评价结果提示细胞产生的耐药性符合预期;冻存细胞。

5.如权利要求4所述构建肿瘤多药耐药细胞模型的方法,其特征在于,步骤(3)所用ROS为H2O2,浓度0.1μmol/L,培养时间为20周。

6.如权利要求5所述构建肿瘤多药耐药细胞模型的方法,其特征在于,各步骤所用培养基为含10%小牛血清的RPMI 1640培养基。

7.如权利要求5或6所述构建肿瘤多药耐药细胞模型的方法,其特征在于,步骤(2)及步骤(3)培养细胞过程中隔天随更换培养基更换ROS。

8.根据权利要求2所述方法建立的人乳腺癌多药耐药细胞株,其特征在于,所述细胞株命名为MCF-7/ROS,保藏在中国典型培养物保藏中心,地址:中国,武汉,武汉大学,

430072;保藏日期:2015年1月28日;保藏编号为CCTCC-C201520。