1.鉴别甘薯染色体的两个DNA重复序列，其特征在于，序列1具有SEQ NO：1所示的核苷酸序列，序列2具有SEQ NO：2所示的核苷酸序列。

2.一种利用权利要求1所述DNA重复序列鉴别甘薯染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于，质粒DNA提取后，通过缺刻平移法，用生物素标记的Itf_1和用地高辛标记的Itf_2，形成Itf_1和Itf_2探针，用于对甘薯染色体的鉴别，具体步骤包括：

1)染色体片的制备

按常规植物材料培养，待植株根尖长至0.5-1cm时，切下生长旺盛的根尖，经8-羟基喹啉在25℃下处理2h后，用卡诺氏固定液固定24h；去离子水冲洗浸泡30min，充分洗去固定液；用含2％纤维素酶和1％果胶酶的纤维素果胶酶在37℃酶解1-2h；去离子水冲洗浸泡

30min，充分洗去酶液；取1-2根尖于干净玻片上，用镊子尖端敲碎根尖，悬空滴加卡诺氏固定液使其充分散开，酒精灯上烤一下，晾干；镜检，选择分散良好的染色体片-20℃保存；

2)荧光原位杂交

①烤片：杂交之前，将制好的片子置于65℃烘箱中干燥30-60min；

②杂交液的配制：取ssDNA4μL和Itf_1，Itf_2探针DNA各3μL，混匀后于65℃烘箱中烘至4μL，再加入70％去离子甲酰胺10μL、50％硫酸葡聚糖4μL、20×SSC 2μL混匀，封口膜封好备用；

③变性液的配制：取双蒸水20μL、20×SSC10μL、70％去离子甲酰胺70μL，混匀，封口膜封好备用；

④探针变性：取出烘箱中的染色体片，将烘箱升温至85℃，将上述变性液加于取出的载玻片上，加上盖玻片；85℃烘箱中变性2-4min；甩掉盖玻片，立即依次浸入-20℃70％、

95％、100％的冰乙醇中各5min；取出玻片，空气中干燥30min以上；

⑤杂交：将杂交液放入沸水中变性10min，迅速置于冰上冷却10min，加于上一步干燥后的载玻片上，盖上盖玻片，室温5-10min；置于80-85℃烘箱中变性2min，放入培养皿中，置于37℃培养箱中培养17-21h；

⑥杂交后洗脱：取出培养箱中的玻片，置于2×SSC中脱色摇床上室温洗脱2×5min；置于42℃2×SSC中洗脱10min；2×SSC中脱色摇床上再次洗脱5min；1×TNT中脱色摇床上洗脱5min，晾干；剪取和玻片大小吻合的封口膜，取出TNB室温融化；避光条件下，取一个

1.5μL的EP管，加入100μL TNB，1μL Bio，0.5μL Dig抗体，混匀，取100μL加于晾干的玻片上，盖上封口膜，置于37℃培养箱中培养1h；取出玻片，置于1×TNT中脱色摇床上洗脱

3×5min；晾干玻片5-10min；

3)信号检测

加13μL DAPI，盖上盖玻片，晾干，封片，置于荧光显微镜下，根据制片坐标确定目标染色体，对染色体进行拍照，然后依次转换滤光片，分别对两个探针的杂交信号进行拍照；

4)二次杂交

①洗片：揭掉第一次杂交的盖玻片，将载玻片置于2×SSC溶液中脱色摇床上洗脱

2×5min；置于2×SSC溶液中脱色摇床上再次洗脱2×10min；然后依次浸入70％、95％、

100％的乙醇中脱色摇床上室温洗脱各5min；置于卡诺氏固定液中固定5min，取出玻片，晾干，充分曝光2-3天；

②荧光原位杂交：用45S，5S rDNA探针进行第二次荧光原位杂交，杂交过程同步骤2，再分别对两个探针的杂交信号进行拍照；采用成像系统分析软件将染色体和杂交信号进行图像合成，用图像处理软件对图像进行调整。

3.根据权利要求2所述的鉴别甘薯染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述Itf_1探针是这样获得的：根据SEQ NO：1所示的核苷酸序列设计引物扩增待测模板，所述引物为，上游引物：5’-TTCCCGATGCGTGGAGTT-3’，下游引物：5’-CTCCATTGCGGTTGTCTTA-3’，采用PCR法合成生物素标记的核苷酸序列如SEQ NO：1所示的探针，得到Itf_1探针；

所述Itf_2探针是这样获得的：根据SEQ NO：2所示的核苷酸序列设计引物扩增待测模板，所述引物为，上游引物：5’-CCCCACCTTCAACCAACT-3’，下游引物：

5’-GCAGCGGTTAGGAGGTGA-3’，采用PCR法合成地高辛标记的核苷酸序列如SEQ NO：2所示的探针，得到Itf_2探针。

4.根据权利要求2或3所述的鉴别甘薯染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述卡诺氏固定液是由3份无水乙醇和1份冰醋酸配制而成。

5.根据权利要求2或3所述的鉴别甘薯染色体的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述荧光原位杂交步骤④中，探针在85℃烘箱中变性3min。