1.一种DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将DNA序列(巯基化:S1、FA-DNA:S2)分别溶解在Tris-HCl缓冲溶液中,并保存备用;
(2)将FA结合到3’端修饰氨基的S2上;
(3)一定浓度S2与Tris-HCl缓冲溶液以一定比例混合均匀后于黑暗中培养数小时;
(4)此FA-S2溶液在PBS缓冲溶液中进行透析,分离多余的FA;
(5)将FR加入到上述透析过的溶液中,黑暗中再培养一段时间;
(6)加入ExoI于上述混合溶液中,水解完成后S2/FA-FR形成;
(7)将S1-AuNP与步骤(6)中S2/FA-FR溶液混合均匀,振荡以得到较稳定的溶液。
2.如权利要求1所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法,其特征在于,步骤(1)中Tris-HCl缓冲溶液pH7.4,并在4℃下保存备用。
3.如权利要求1或2所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法,其特征在于,步骤(2)中使用琥珀酰亚胺耦合法EDC-NHS将FA结合到3’端修饰氨基的S2上。
4.如权利要求1-3中任一项所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法,其特征在于,步骤(3)中Tris-HCl缓冲溶液的pH7.4,含10mMFA,1mMEDC,5mMSulfo-NHS,且于37℃黑暗中培养;和/或,步骤(3)中,0.5mL20μMS2与0.5mL100mMTris-HCl缓冲溶液混合均匀后于37℃黑暗中培养3h。
5.如权利要求1-4中任一项所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法,其特征在于,步骤(4)中缓冲溶液pH7.4,多余的FA分子量筛截:1000Da。
6.如权利要求1-5中任一项所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法,其特征在于,步骤(5)中FR为标准系列浓度,37℃黑暗中培养2h,和/或步骤(6)中加入400U/mLExoI,和/或水解30分钟。
7.如权利要求1-6中任一项所述的DNA修饰的金纳米比色传感器的制备方法,其特征在于,步骤(7)中,400μLS1-AuNPs与200μL步骤(6)中S2/FA-FR溶液混合均匀,轻轻振荡5分钟以得到较稳定的溶液,然后将此溶液与黑暗中培养2h后得到系列标准比色溶液;
和/或,步骤(7)中S1-AuNPs的制备采用:利用化学还原法,先合成出尺寸均匀的AuNPs分散溶液,再将有巯基修饰的DNA-S1修饰到粒子表面。
8.一种DNA修饰的金纳米比色传感器,其特征在于,其由权利要求1-7所述的方法制备得到。
9.一种权利要求8所述金纳米比色传感器的用途,其特征在于,基于尾端保护比色检测叶酸受体。
10.一种权利要求8所述金纳米比色传感器的用途,其特征在于,适用于FR的可视实时检测,检测范围约为0.5to50μg/mL。