1.一种用于检测食品、饮料、茶叶、土壤、动物组织等样品中的锌离子残留与含量的酶联免疫试剂盒。

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2.根据权利要求1所述锌离子酶联免疫试剂盒，其特征在于：包括包被Zn -DOTA-BSA

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或Zn -DOTA-OVA并封闭好的96孔或48孔酶标板，以Zn -DOTA-BSA或Zn -DOTA-OVA为

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抗原制备的铜离子多克隆或单克隆抗体Zn +mAb或pAb，酶标二抗为兔抗鼠或羊抗鼠抗体

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标记辣根过氧化物酶RaMIgG-HRP或GaMIgG-HRP，Zn 螯合物配置的标准品稀释液，洗液为

0.01mol／L、pH7.4的磷酸盐缓冲液含0.05％Tween-20(PBST)，底物显色剂A为过氧化脲，底物显色剂B为四甲基联苯胺(TMB)，终止液为2mol／L的硫酸溶液。

3.根据权利要求1、2所述的锌离子酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述的酶联免疫试剂盒由以下步骤制备：

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(1)包被：酶标板上用Zn -DTPA-BSA包被；

(2)封闭；采用浓度为0.05％的猪血清进行封闭；

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(3)单克隆抗体的制备：用Zn -DOTA-KLH和Zn -DOTA-BSA分别免疫6周龄雌性BALB／C小鼠。采用细胞融合技术无菌取脾脏制备脾细胞，在聚乙二醇-1500作用下与NS0骨髓瘤细胞进行融合；用间接ELISA法和阻断ELISA法进行阳性孔筛选，选择强阳性、抑制率高、细胞生长旺盛的孔进行有限稀释克隆化，扩大培养、冻存并鉴定，获得一株杂交瘤细胞株；之后采用体内诱生腹水法制备抗锌离子螯合物的mAb；

(4)EDTA反应液的配制：称取10mg EDTA溶于10mM HBS缓冲液配制成浓度为

34.2mmoL／L EDTA溶液；

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(5)Zn 标准溶液的配制：称取100mg氯化锌溶于100μL浓硝酸，待充分溶解加超纯水使终体积为1mL，形成锌溶液，与EDTA溶液混匀后，用NaOH调节pH值，室温反应24小时，即

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形成Zn -EDTA鳌合物溶液。

(6)二抗的配制：酶标二抗RaMIgG-HRP或GaMIgG-HRP按照1：1000的工作浓度用洗液稀释分装；

(7)底物、显色液与洗液的配制：底物、显色液与洗液分装配制；

(8)终止液为2mol／L的硫酸溶液。

4.根据权利要求3所述锌离子酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述的检测抗原

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Zn -DOTA-Proten，其制备步骤：(1)称取100mg氯化锌溶于浓硝酸，溶解后加超纯水使终体积为1mL，形成锌溶液；

(2)称取10mg EDTA溶于10mM HBS缓冲液配制成EDTA溶液；

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(3)将(1)，(2)混匀后，用NaOH调节pH值，反应24小时，形成Zn -EDTA鳌合物溶液；

(3)分别称取20mg载体蛋白溶于1mL浓度为10mmoL／L HBS中形成蛋白溶液；

(4)称取10mg DTPA溶于1mL二甲基亚砜(DMSO)中形成金属鳌合剂溶液；

(5)分别取160uL DTPA加到1mL蛋白溶液中，NaOH调节pH值，室温反应24h，形成蛋白螯合剂；

(6)取16μL锌溶液到蛋白螯合剂溶液中，室温反应24小时，纯化后得锌离子鳌合物人

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工抗原，Zn -DTPA-Proten。

5.根据权利要求1、2所述锌离子残留与含量的酶联免疫试剂盒，其特征在于：其检测操作包括以下步骤：(1)样品前处理方法：用0.1mol／L EDTA螯合物溶液处理待检样品，离心取上清液用于检测。

(2)加样步骤：

第一步，除第一排最后两孔分别为阴性对照和空白对照外，每孔加入50μL工作浓度

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的C1号液Zn mAb，同时加入等体积Zn -EDTA鳌合物标准液，其他孔根据检测要求加入

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50μL已处理的待检样品和等体积工作浓度的C1号液Zn mAb，混匀后37℃温育15min，反应后用PBST洗板；

第二步，每孔加入50μL工作浓度的RaRIgG-HRP／GaMIgG-HRP，37℃温育25min，PBST洗板；

第三步，每孔加入100μL的酶底物A、B混合液显色，室温反应5min，每孔加入100μL终止液，用酶标仪读A450值，记录结果。

(3)分析检测结果：将第一排的标准液显色的OD值进行数据处理，得出回归方程式，然后将待测物的OD值放入标准曲线的回归方程式中进行计算，乘以稀释倍数后得出待测样品中锌离子的含量。

6.根据权利4所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述载体蛋白包括鸡卵清白蛋白(OVA)，牛血清白蛋白(BSA)，血蓝蛋白(KLH)。

7.根据权利要求1-4所述锌离子酶联免疫试剂盒，其特征在于：酶标板上用

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Zn -DTPA-BSA包被，包被蛋白质浓度为0.05mg／mL；锌离子mAb的工作浓度为1：5

3.2×10。

8.根据权利要求1～5所述锌离子酶联免疫试剂盒，其特征在于：样品处理简单，适合于大量样品的快速检测和筛选，具有高特异性、高灵敏度、高精确率等特点，IC50为

29.08μg/L，最低检测限为0.248μg／L，检测范围为3.774～442.39μg／L。

9.根据权利要求1～8所述锌离子酶联免疫试剂盒，准确性测定通过对土壤、自来水和猪肉的添加回收，以回收率和变异系数(CV)确定其准确度。土壤的回收率平均为85.36％；

自来水的回收率平均为81.43％；猪肉的回收率平均为82.76％。平均CV小于15％，锌离子酶联免疫试剂盒具有较高准确度。