1.本发明涉及一种从红花鹿蹄草提取物中分离纯化活性成分梅笠草素的方法,具体包括如下步骤:
(1)匀浆诱导和酶水解:将红花鹿蹄草全株通过匀浆诱导技术诱导,再经过酶水解技术得到固体物质;
(2)提取:将诱导和酶水解得到的固体物质采用负压空化提取技术进行提取,将诱导和水解液及负压空化提取液合并浓缩后通过超声波振荡絮凝技术得到絮凝物,将絮凝物采用液固萃取技术萃取;
(3)分离:将萃取得到的萃取液浓缩后通过一次中压正相硅胶柱层析后得到梅笠草素粗制品;
(4)结晶:将梅笠草素的粗制品经过低温析晶和重结晶技术得到纯度大于95%的纯品。
2.按照权利要求1所述的一种从红花鹿蹄草提取物中分离纯化活性成分梅笠草素的方法,其特征在于步骤(1)中所述的匀浆诱导技术,其所用溶剂为水,温度为30-50°C,体积为固体质量的3-8倍,连续匀浆诱导三次,每次5-10分钟。
3.按照权利要求1所述的一种从红花鹿蹄草提取物中分离纯化活性成分梅笠草素的方法,其特征在于步骤(1)中所述的酶水解技术,首先将匀浆诱导后的浆液用柠檬酸、冰醋酸或盐酸调pH为3.0-6.0,然后取0.1-2%固形物重量的纤维素酶、果胶酶和葡萄糖苷酶中的两种组成复合酶,溶于pH为3.0-6.0的缓冲液中,在40-60°C水浴中激活5-15分钟,将激活后的复合酶缓冲液加入匀浆诱导浆液中,在温度为30-50°C的水浴中酶解2-5小时。
4.按照权利要求1所述的一种从红花鹿蹄草提取物中分离纯化活性成分梅笠草素的方法,其特征在于步骤(2)中所述的负压空化提取技术,其所用乙醇浓度为70-90%,压力为
0.03-0.08MPa,固液比为1:10-1:30(g:mL),室温提取1-5次,每次提取30-90分钟。
5.按照权利要求1所述的一种从红花鹿蹄草提取物中分离纯化活性成分梅笠草素的方法,其特征在于步骤(2)中所述的超声波振荡絮凝技术,其温度为30-50oC,体积为提取物体积的3-8倍,超声波振荡絮凝时间为10-25分钟,频率为30-60KHz,静置时间为15-30分钟。
6.按照权利要求1所述的一种从红花鹿蹄草提取物中分离纯化活性成分梅笠草素的方法,其特征在于步骤(2)中所述的液固萃取技术,其所用溶剂包括石油醚、正己烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和二氯甲烷中的一种,液固比5-20:1(mL:g),萃取次数为5-10次。
7.按照权利要求1所述的一种从红花鹿蹄草提取物中分离纯化活性成分梅笠草素的方法,其特征在于步骤(3)中所述的中压正相硅胶柱层析分离技术,其具体过程如下,预先称取质量为样品量10-20倍的硅胶,所用硅胶为300-400目,采用湿法装柱,所用溶剂包括石油醚、正己烷和乙酸乙酯,将样品加入有机溶剂溶解,加入与浸膏质量比为1.2:1(w/w)的层析硅胶拌匀、减压蒸干,装入预先装好的硅胶柱中,先后以10BV石油醚或正己烷、5-50BV石油醚或正己烷:乙酸乙酯或氯仿为80:1-15:1洗脱,收集洗脱液,每份150-250mL,用硅胶薄层层析检测洗脱液成分,合并相同部分,展开剂为石油醚或正己烷:乙酸乙酯或氯仿=100:1-2:1,紫外波长为254nm和365nm。
8.按照权利要求1一种从红花鹿蹄草提取物中分离纯化活性成分梅笠草素的方法,其特征在于步骤(4)所述的低温析晶和重结晶技术,其所用溶剂为石油醚和正己烷中的一种与乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷中的一种,以30:1-10:1的比例混合,温度为-4-20°C。