1.一种家蚕病原微孢子虫LAMP可视化快速检测试剂盒,其特征在于,包括一对内侧引物NFI1/ NBI1和一对外侧引物NF1/ NB1,引物序列如SEQ ID NO:1~4所示。
2.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包含基因组DNA裂解液、LAMP反应液、阳性对照品、阴性对照品和显色液;
所述LAMP反应液除含有权利要求1所述引物还含有2×LAMP反应缓冲液、Bst DNA 聚合酶、密封液和无菌水。
3.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,所述2×LAMP反应缓冲液含有20 mM Tris-HCl,pH8.8;10 mM KCl;2 mM MgSO4;20 mM(NH4)2SO4;0.1% Triton X-100;2.8 mM dNTPs;1M甜菜碱;25mM MgCl2。
4.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述DNA裂解液含有10 mM Tris-Cl,pH8.
0;0. 1 M EDTA,pH 8. 0;0. 5% SDS。
5.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述阳性对照品为微孢子虫基因组DNA或含有微孢子虫SSUrRNA基因片段的重组质粒、阴性对照品为正常家蚕组织模板DNA。
6.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述显色液为SYBR Green I、EvaGreen或钙黄绿素。
7.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的反应体系为:
2×LAMP反应缓冲液 12.5μL;
引物NFI1/ NBI1和NF1/ NB1 1μL ;
Bst DNA 聚合酶(8U/μL) 1μL;
模板DNA 2μL;
无菌水 8.5μL;
引物NF1和NB1的浓度都为5pmol/μL;引物NFI1和NBI1的浓度都为40pmol/μL。
8.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的LAMP反应条件为60~65℃恒温反应30~90 min;然后 80~100℃,放置1~10 min灭活。
9.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,所述密封液为甘油。
10.一种用权利要求1至9任一项所述试剂盒检测家蚕病原微孢子虫的方法,其特征在于,包括如下步骤:S1.提取待测样品DNA;
S2.在反应管中配置反应体系;
S3.向反应体系中加入密封液,在反应管盖内侧加入显色液;
S4.反应:将反应管60~65℃恒温反应30~90 min;然后 80~100℃,灭活1~10min;
S5.结果判读:将显色液与反应产物混合;观察颜色变化,反应产物颜色变为绿色,说明待测样品含有家蚕病原微孢子虫;反应产物变为橙色,则不含有家蚕病原微孢子虫。