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专利号: 2012103122266
申请人: 浙江农林大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种水果可溶性糖快速测定方法,其特征是按如下步骤进行:

(1)样品可溶性糖的提取:用不锈钢小样品勺挖取少量待测水果的果肉,放入试管中,每个样品准确称取50~150mg,记录所取样品名及其重量;用移液枪吸取500~1000μL纯水加入到试管中,用试管研磨棒将样品迅速充分匀浆,然后将装有匀浆液的试管置于微波炉中,低火加热10~40s至其沸腾即停止加热;或用水浴锅100℃加热5~10min使糖代谢酶完全失活;试管稍冷却后涡旋混匀,5000rpm常温离心3~5min,将上清液即含有可溶性糖的溶液移入新试管中,用移液枪取上清液时尽量避免碰到沉淀物;在离心后的沉淀物中加入500~1000μL纯水,涡旋、离心后移取上清液至新试管,如此重复2~3次以充分提取样品中的糖;合并所有上清液;

(2)样品提取物预处理:步骤(1)提取的液体中若含有少量固体物质,则先用滤纸过滤,无固体物质就直接用固相萃取柱吸附技术进行去除果实中花青素、叶黄素的预处理;

(3)高纯度的标准溶液制备:准确称取单糖、双糖、三糖标样各1.00g,用纯水定容至

50mL,摇匀得20mg/mL的糖标准母液;再用纯水将糖标准母液分别稀释成2.00,4.00,6.00,

8.00,10.00mg/mL的系列糖标准溶液,分装于各试管中;

(4)用电喷雾质谱即ESI-MS进行提取物的纯净度检测:ESI-MS检测条件为负极电喷雾状态,正离子扫描,扫描范围为100~2000质量/电荷比,进样流速为20μL/min;若检测到杂质较多,则需要将样品用固相萃取柱进行再次或多次过柱去杂;

(5)样品的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱即MALDI-TOF MS检测:将标准样品和经过步骤(4)检测后满足条件的预处理的样品提取物分别与上样基质即matrix各1μL等量混合,点样于靶板即Target Plate上,室温下自然结晶后开启MALDI-TOF MS进行质谱扫描,扫描范围为100~2000质量/电荷比,读取并记录峰面积;

(6)糖标准曲线制作:根据一系列糖标准样品的质谱扫描结果以标准工作液的浓度为横坐标、峰面积为纵坐标,制作糖标准曲线,用于样品中糖含量的定量分析;

(7)样品糖的定性和定量分析:将样品提取物质谱扫描结果与标准品质谱扫描结果进行比对,确定样品中的糖成分,实现定性分析;根据标准品测定结果制作的标准曲线和样品质谱扫描结果对样品中的糖进行定量分析。