1.一种桑黄活性多糖的制备方法,其特征在于:所述方法包含有以下的步骤:
1)菌种活化
在改良PDA培养基中接种桑黄菌丝体,25~30℃,有氧避光培养至桑黄菌丝体长满斜面;
上述的1L改良PDA培养基中:马铃薯180~200g、葡萄糖10~20g、琼脂20g、抗氧化剂0.5~6g,余量为水,改良PDA培养基的pH为6.5;
2)一级种子液培养
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按照每50ml的种子液培养基中接入3块1cm 的斜面菌种的量,将活化后的斜面菌种接入装有种子液培养基的三角瓶中,25~30℃,摇床培养120~240小时,摇床转速150~
180r/min;
上述的1L种子液培养基中:马铃薯200~260g、葡萄糖5~30g、KH2PO41g、MgSO4 0.5g、抗氧化剂1~6g、CaCl2 0.1~2g、FeSO4 0.05~0.35g,余量为水,种子液培养基的pH为
6.5;
3)二级种子液培养
将步骤2)所得的菌种按照菌种与种子液培养基的体积比为1:10~15的量接入装有种子液培养基的三角瓶中,25~30℃摇床培养120小时,摇床转速180r/min,得到扩大培养的菌种;
4)定向发酵
将步骤3)扩大培养的菌种转接入装有定向发酵培养基的发酵罐中,菌种与定向发酵培养基的体积比为1:10~15,保持罐温28~29℃,罐压0.5-0.7kPa,搅拌速率300~
400rpm,通气量为1:0.5~0.7v/v.m,发酵180~220小时,得到发酵液;
上述的1L定向发酵培养基中:麦芽粉5~20g、葡萄糖15~100g、FeSO40.1~0.6g、抗氧化剂1~6g、天门冬氨酸0.5~8g、MgSO4 1g、KH2PO4 1~2g、复合维生素0.001~
0.05g、吐温801~10g,余量为水,定向发酵培养基的pH为6.5;
5)提取桑黄活性多糖
将步骤4)得到的发酵液打到减压浓缩器中,浓缩至浓缩液的体积为原发酵液体积的
0.1~0.25倍,转移到贮罐中,经板框压滤,压滤清液浓缩,加入乙醇至乙醇在浓缩清液中的体积浓度达到60%~80%,低温醇析10~20小时,取沉淀物用去离子水溶解,喷雾干燥,得到桑黄活性多糖。
2.根据权利要求1所述的桑黄活性多糖的制备方法,其特征在于:所述步骤4)的定向发酵培养基中:麦芽粉8~15g、葡萄糖20~100g、FeSO4 0.2~0.5g、抗氧化剂1~6g、天门冬氨酸0.5~8g、MgSO4 1g、KH2PO4 1g、复合维生素0.001~0.05g、吐温801~10g,余量为水,定向发酵培养基的pH为6.5。
3.根据权利要求1所述的桑黄活性多糖的制备方法,其特征在于:所述步骤1)的改良PDA培养基中:马铃薯185~195g、葡萄糖13~18g、琼脂20g、抗氧化剂1~2g,余量为水。
4.根据权利要求1所述的桑黄活性多糖的制备方法,其特征在于:所述步骤2)中的种子液培养基中:马铃薯220~240g、葡萄糖10~20g、KH2PO4 1g、MgSO40.5g、抗氧化剂2~5g、CaCl2 0.1~1g、FeSO4 0.1~0.25g,余量为水,种子液培养基为6.5。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的桑黄活性多糖的制备方法,其特征在于:所述抗氧化剂是维生素C或维生素P或芦丁。
6.根据权利要求1所述的桑黄活性多糖的制备方法,其特征在于:步骤1)所述桑黄菌丝体的名称为Phellinus sp.P0988,保藏单位为中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M2012080,保藏日期是2012年3月14日。