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专利号: 2010105677405
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)WZ009,保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:中国,武汉,武汉大学,430072,保藏编号:CCTCCN0 =M 2010171,保藏日期:2010年7月8曰。

2.如权利要求1所述的巨大芽孢杆菌WZ009在微生物转化制备R-4-氯-3-羟基丁酸酯和S-3-羟基丁内酯中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用为:以式⑴所示的外消旋 4-氯-3-羟基丁酸酯为底物,以巨大芽孢杆菌WZ009含酶菌体细胞为催化剂,在pH6. 5〜 7. 5反应体系中,于20〜50°C下反应1〜Mh,反应结束后反应液经分离纯化得到式(II) 所示的R-4-氯-3-羟基丁酸酯和S-3-羟基丁内酯;

式(I)、(II)中,R为Cl〜C4的烷基。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应在pH6. 5〜7. 5的磷酸盐缓冲液中进行。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应在水/正己烷两相反应体系中进行, 水和正己烷体积比为1 : 1。

6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应以蒸馏水为反应溶剂,反应过程中用0. OlM〜0. 2M氢氧化钠或氨水滴定调控反应体系保持为pH7. 0 士 0. 2。

7.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述底物为外消旋4-氯-3-羟基丁酸甲酯或外消旋4-氯-3-羟基丁酸乙酯。

8.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应体系中:底物初始浓度为10〜 200mmol/L,催化剂为巨大芽孢杆菌WZ009冻干菌粉、添加量为10〜100g/L。

9.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应在25〜35°C、摇床转速100〜200r/ min下进行,反应时间10〜Mh。

10.如权利要求3所述的应用,其特征在于:所述底物为外消旋4-氯-3-羟基丁酸乙酯,所述分离纯化方法如下:反应结束后,离心去除菌体,取上清液用等体积乙酸乙酯萃取分离,得到含有R-4-氯-3-羟基丁酸乙酯和S-3-羟基丁内酯的有机相,无水硫酸钠干燥, 过滤后取滤液进行减压蒸馏,先除去溶剂,收集90〜100°C (5mmHg)馏分得到R_4_氯-3-羟基丁酸乙酯,收集130〜140°C (5mmHg)馏分得到S-3-羟基丁内酯。