欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13336804447 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13336804447
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2010101086177
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种乙酰乙酸乙酯微生物转化制备(S)-3-羟基丁酸乙酯的方法,其特征在于所述方法是以乙酰乙酸乙酯为底物,以酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)CGMCC No.2266发酵获得的含酶菌体细胞为生物催化剂,进行转化反应制得所述(S)-3-羟基丁酸乙酯。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述方法包括:在pH 5.0~8.0的磷酸盐缓冲液中,以乙酰乙酸乙酯为底物、以酿酒酵母CGMCC No.2266发酵获得的含酶菌体细胞为生物催化剂,于25~45℃下进行转化反应8~40小时,反应结束后,转化液经分离纯化得到所述(S)-3-羟基丁酸乙酯。

3.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述乙酰乙酸乙酯在磷酸盐缓冲液中的初始浓度为0.05~0.25mol/L。

4.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述含酶菌体细胞用量以细胞干重计为1~

50g/g底物。

5.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述磷酸盐缓冲液中还添加有50~150g/L的葡萄糖作为辅助底物。

6.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述含酶菌体细胞由如下方法制备得到:将酿酒酵母CGMCC No.2266接种至发酵培养基中,培养温度为26~35℃,摇床转速为150~

200r/min,培养18~30h得到含有含酶菌体细胞的发酵液;所述发酵培养基按如下组成配制:葡萄糖26~32g/L,酵母粉2~4g/L,硫酸铵3~6g/L,无水MgSO4 0.2~0.4g/L,K2HPO4·3H20 0.5~1.5g/L,KH2PO4 0.6~1.5g/L,自然pH值,溶剂为水。

7.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述分离纯化方法如下:将转化液离心分离弃去菌体细胞,取上清液50~70℃水浴1~2小时弃去沉淀,取清液用等体积正己烷萃取,萃余液减压蒸馏蒸出水分,残余物用正己烷溶解,所得混合液抽滤除去磷酸盐,取正己烷层加入无水硫酸钠脱水,抽滤后,得到的正己烷溶液蒸馏除去正己烷即得所述(S)-3-羟基丁酸乙酯。

8.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述方法如下:

(1)斜面培养:将酿酒酵母CGMCC No.2266接种到斜面培养基,26~35℃培养4~6天得菌体斜面;所述的斜面培养基按如下组成配制:麦芽汁5~15g/L,酵母粉2~4g/L,蛋白胨4~6g/L,葡萄糖7~12g/L,琼脂15~25g/L,自然pH值,溶剂为水;121℃灭菌20min,灭菌后冷却制成斜面;

(2)种子培养:从斜面培养基取一环菌体转接到种子培养基,26~35℃,摇床转速为

150~200r/min,培养18~26h得种子液;所述的种子培养基按如下组成配制:葡萄糖

26~32g/L,酵母粉2~4g/L,硫酸铵3~6g/L,无水MgSO4 0.2~0.4g/L,K2HPO4·3H20

0.5~1.5g/L,KH2PO4 0.6~1.5g/L,自然pH值,溶剂为水;

(3)发酵培养:取种子液,以体积比10~20%的接种量接种于发酵培养基中,培养温度为26~35℃,摇床转速为150~200r/min,培养18~30h得到含有含酶菌体细胞的发酵液,离心分离得到所述含酶菌体细胞;所述发酵培养基按如下组成配制:葡萄糖26~32g/L,酵母粉2~4g/L,硫酸铵3~6g/L,无水MgSO4 0.2~0.4g/L,K2HPO4·3H20 0.5~1.5g/L,KH2PO4 0.6~1.5g/L,自然pH值,溶剂为水;

(4)生物转化:在pH 5.0~8.0的磷酸盐缓冲液中,加入0.05~0.25mol/L的乙酰乙酸乙酯和50~150g/L的葡萄糖,以及以细胞干重计为1~50g/g乙酰乙酸乙酯的含酶菌体细胞,于25~45℃下进行转化反应8~40小时;

(5)分离纯化:转化液离心分离弃去菌体细胞,取上清液50~70℃水浴1~2小时弃去沉淀,取清液用等体积正己烷萃取,取萃余液减压蒸馏蒸出水分,残余物用正己烷溶解,所得混合液抽滤除去磷酸盐,取正己烷层加入无水硫酸钠脱水,抽滤后,得到的正己烷溶液蒸馏除去正己烷即得所述(S)-3-羟基丁酸乙酯。