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专利号: 2009102631464
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一株不对称转化制备(R)-苯基乙二醇的重组菌,其分类命名为大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET32a-mrcr,已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号:CCTCC NO:M209289。

2.利用定点突变后构建的重组菌CCTCC NO:M209289不对称转化制备(R)-苯基乙二醇的方法,其特征是步骤为:(1)重组菌株CCTCC NO:M209289的培养

采用LB液体培养基以g/L计:胰蛋白胨10,酵母提取物5,NaCl 10,pH 7.0;固体培养基再添加液体培养基重量1.5%的琼脂粉;

培养条件:挑取重组菌株CCTCC NO:M209289的单菌落接种于3mL含100μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中,于37℃ 200rpm振荡培养过夜;取1mL培养液转接于50mL含

100μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中,于37℃ 200rpm振荡培养至OD600为0.6~0.8;

加入诱导物异丙基-β-D-硫代半乳糖苷1mmol/L,30℃下诱导培养过夜,10,000rpm离心

10min,收集菌体,用生理盐水洗涤两次,收集得到重组菌全细胞;

(2)以重组菌全细胞为催化剂,以2-羟基苯乙酮为底物,进行不对称转化反应:5mL

0.1mol/L pH 5.0~6.0的醋酸缓冲液,或5mL 0.1mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液,或5mL

0.1mol/L pH 8.0~9.0的Tris-HCl缓冲液中,重组菌全细胞浓度为0.1~0.2g/mL,底物浓度为5g/L,反应温度30℃,反应时间为48h。